pFC32K Nluc-CMV-neo-Flexi

价格:1500元

联系方式:I47-825O-882O

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pFC32K载体基本信息

出品公司: Promega
载体名称: pFC32K ; pFC32K Nluc-CMV-neo-Flexi
质粒类型: 哺乳动物载体;NanoLuc素酶报告载体
高拷贝/低拷贝: --
克隆方法: 限制性内切酶,多克隆位点
启动子: CMV IE
载体大小: 5119 bp
5' 测序引物及序列: T7 Forward:TAATACGACTCACTATAGGG
3' 测序引物及序列: --
载体标签: NanoLuc
载体抗性: 氨苄青霉素
筛选标记: 新霉素(Neomycin)
克隆菌株: TOP10等常规菌株
宿主细胞(系): 常规哺乳动物细胞等
备注: pFC32K Nluc-CMV-neo-Flexi载体表达NanoLuc融合蛋白;NanoLuc萤光素酶(Nluc)更小(19.1kDa)、更亮(比萤火虫和海肾萤光素酶亮度高 100 倍)。
产品目录号: N1311
稳定性: 瞬表达或稳表达
组成型/诱导型: 组成型
病毒/非病毒: 非病毒

pFC32K载体质粒图谱和多克隆位点信息

pFC32K Nluc CMV-neo Flexi载体图谱



pFC32K载体图谱



pFC32K载体简介

NanoLuc萤光素酶融合表达载体pFC32K Nluc-CMV-neo-Flexi

更小(19.1kDa)、更亮(比萤火虫和海肾萤光素酶亮度高 100 倍)的 NanoLuc萤光素酶(Nluc)非常适用于蛋白融合应用。NanoLuc 融合蛋白应用广泛:作为蛋白稳定性报告基因、生物发光法细胞成像(BLI)探针或作为供体信号用于生物发光共振能量转移(BRET)研究蛋白: 蛋白或蛋白: 小分子相互作用研究。
NanoLuc 蛋白融合载体可方便的 N- 或 C-端融合 Nluc 和您感兴趣蛋白的融合蛋白;有两类形式载体可供选择:
pNLF 载体系列:产生 N- 或 C- 端融合全长 Nluc 的融合蛋白或应用传统的克隆方法(多克隆位点)将分泌型 Nluc 克隆到感兴趣的蛋白 N 端。 
pF 载体系列:使用 Flexi Vector Cloning System 产生 N- 端或 C- 端融合蛋白;Flexi Vector Cloning System 是一种直接克隆方法,基于两种稀有酶切位点 SgfI 和 PmeI,可以在 Flexi 载体之间转换蛋白编码序列,快速、高效和高保真。

特点 - 优点
 轻松定量蛋白丰度变化:使用 Nano-Glo Luciferase Assay System 进行单一试剂加样,来定量 NanoLuc 融合蛋白的信号,进而检测细胞内蛋白水平。
 生物相关性更高:NanoLuc 报告基因光信号更强,内源性表达水平的 NanoLuc 融合蛋白即可被检测到,可避免过度表达造成的假象。
 使蛋白的细胞内动态变化可视化:NanoLuc 报告基因光信号更强,缩短了成像曝光时间,无需反复激发样本,从而降低了激发造成的细胞毒性反应。
 改进 BRET 研究技术:NanoLuc 拥有更强的光信号,蓝移的发射光谱,因而与荧光受体的光谱交叉更少,信噪比更佳,动态范围更宽。
 灵活的克隆选择:可使用传统克隆方法或 Flexi 克隆系统轻松将 NanoLuc 与目标蛋白的 C 端或 N 端融合。
 可实现从瞬时转染到稳定转染的轻松过渡:所有载体都含有用于建立稳定细胞系的哺乳动物筛选标志物。

应用
 化合物筛选
 蛋白: 蛋白相互作用
 蛋白: 小分子相互作用
 生物发光成像
 蛋白稳定性研究

pFC32K载体序列

LOCUS       KF811456                5119 bp    DNA     circular SYN 03-FEB-2014
DEFINITION  NLuc CMV-Neo Flexi Vector pFC32K, complete sequence.
ACCESSION   KF811456
VERSION     KF811456.1  GI:576890565
KEYWORDS    .
SOURCE      NLuc CMV-Neo Flexi Vector pFC32K
  ORGANISM  NLuc CMV-Neo Flexi Vector pFC32K
            other sequences; artificial sequences; vectors.
REFERENCE   1  (bases 1 to 5119)
  AUTHORS   McNamara,B., Kopish,K. and Robers,M.
  TITLE     Direct Submission
  JOURNAL   Submitted (04-NOV-2013) Scientific Communications, Promega
            Corporation, 5500 E. Cheryl Parkway, Madison, WI 53711, USA
FEATURES             Location/Qualifiers
     source          1..5119
                     /organism="NLuc CMV-Neo Flexi Vector pFC32K"
                     /mol_type="other DNA"
                     /db_xref="taxon:1454399"
     regulatory      1..742
                     /regulatory_class="promoter"
                     /note="CMV immediate early enhancer/promoter"
     intron          857..989
                     /note="chimeric"
     regulatory      1033..1052
                     /regulatory_class="promoter"
                     /note="T7 promoter"
     misc_feature    1056..1063
                     /note="used in Flexi vector cloning; SgfI site"
     CDS             1087..1422
                     /codon_start=1
                     /transl_table=11
                     /product="barnase"
                     /protein_id="AHH41355.1"
                     /db_xref="GI:576890567"
                     /translation="MAQVINTFDGVADYLQTYHKLPDNYITKSEAQALGWVASKGNLA
                     DVAPGKSIGGDIFSNREGKLPGKSGRTWREADINYTSGFRNSDRILYSSDWLIYKTTD
                     HYQTFTKIR"
     misc_feature    1442..1447
                     /note="EcoICRI site"
     misc_feature    1447..1461
                     /note="linker, C-terminal NanoLuc"
     CDS             <1462..1974
                     /note="C-terminus"
                     /codon_start=1
                     /transl_table=11
                     /product="NanoLuc luciferase"
                     /protein_id="AHH41356.1"
                     /db_xref="GI:576890568"
                     /translation="VFTLEDFVGDWRQTAGYNLDQVLEQGGVSSLFQNLGVSVTPIQR
                     IVLSGENGLKIDIHVIIPYEGLSGDQMGQIEKIFKVVYPVDDHHFKVILHYGTLVIDG
                     VTPNMIDYFGRPYEGIAVFDGKKITVTGTLWNGNKIIDERLINPDGSLLFRVTINGVT
                     GWRLCERILA"
     regulatory      2108..2329
                     /regulatory_class="polyA_signal_sequence"
                     /note="SV40 late polyA signal"
     regulatory      2428..2840
                     /regulatory_class="promoter"
                     /note="SV40 early enhancer/promoter"
     regulatory      2854..2920
                     /regulatory_class="promoter"
                     /note="Em7 bacterial promoter"
     gene            2934..3728
                     /gene="neoR/kanR"
     CDS             2934..3728
                     /gene="neoR/kanR"
                     /function="resistance to neomycin and kanamycin"
                     /codon_start=1
                     /transl_table=11
                     /product="neomycin phosphotransferase"
                     /protein_id="AHH41354.1"
                     /db_xref="GI:576890566"
                     /translation="MIEQDGLHAGSPAAWVERLFGYDWAQQTIGCSDAAVFRLSAQGR
                     PVLFVKTDLSGALNELQDEAARLSWLATTGVPCAAVLDVVTEAGRDWLLLGEVPGQDL
                     LSSHLAPAEKVSIMADAMRRLHTLDPATCPFDHQAKHRIERARTRMEAGLVDQDDLDE
                     EHQGLAPAELFARLKARMPDGEDLVVTHGDACLPNIMVENGRFSGFIDCGRLGVADRY
                     QDIALATRDIAEELGGEWADRFLVLYGIAAPDSQRIAFYRLLDEFF"
     regulatory      3792..3840
                     /regulatory_class="polyA_signal_sequence"
                     /note="synthetic polyA signal"
     rep_origin      4076..4112
                     /note="ColE1-derived plasmid replication origin"
ORIGIN      
        1 tcaatattgg ccattagcca tattattcat tggttatata gcataaatca atattggcta
       61 ttggccattg catacgttgt atctatatca taatatgtac atttatattg gctcatgtcc
      121 aatatgaccg ccatgttggc attgattatt gactagttat taatagtaat caattacggg
      181 gtcattagtt catagcccat atatggagtt ccgcgttaca taacttacgg taaatggccc
      241 gcctggctga ccgcccaacg acccccgccc attgacgtca ataatgacgt atgttcccat
      301 agtaacgcca atagggactt tccattgacg tcaatgggtg gagtatttac ggtaaactgc
      361 ccacttggca gtacatcaag tgtatcatat gccaagtccg ccccctattg acgtcaatga
      421 cggtaaatgg cccgcctggc attatgccca gtacatgacc ttacgggact ttcctacttg
      481 gcagtacatc tacgtattag tcatcgctat taccatggtg atgcggtttt ggcagtacac
      541 caatgggcgt ggatagcggt ttgactcacg gggatttcca agtctccacc ccattgacgt
      601 caatgggagt ttgttttggc accaaaatca acgggacttt ccaaaatgtc gtaataaccc
      661 cgccccgttg acgcaaatgg gcggtaggcg tgtacggtgg gaggtctata taagcagagc
      721 tggtttagtg aaccgtcaga tcactagaag ctttattgcg gtagtttatc acagttaaat
      781 tgctaacgca gtcagtgctt ctgacacaac agtctcgaac ttaagctgca gaagttggtc
      841 gtgaggcact gggcaggtaa gtatcaaggt tacaagacag gtttaaggag accaatagaa
      901 actgggcttg tcgagacaga gaagactctt gcgtttctga taggcaccta ttggtcttac
      961 tgacatccac tttgcctttc tctccacagg tgtccactcc cagttcaatt acagctctta
     1021 aggctagagt attaatacga ctcactatag ggctagcgat cgccatggaa taagtaagga
     1081 atccacatgg cacaggttat caacacgttt gacggggttg cggattatct tcagacatat
     1141 cataagctac ctgataatta cattacaaaa tcagaagcac aagccctcgg ctgggtggca
     1201 tcaaaaggga accttgcaga cgtcgctccg gggaaaagca tcggcggaga catcttctca
     1261 aacagggaag gcaaactccc gggcaaaagc ggacgaacat ggcgtgaagc ggatattaac
     1321 tatacatcag gcttcagaaa ttcagaccgg attctttact caagcgactg gctgatttac
     1381 aaaacaacgg accattatca gacctttaca aaaatcagat aatgtttaat gaccccgtgt
     1441 cgagctctcg gctcgagcgg cgtcttcaca ctcgaagatt tcgttgggga ctggcgacag
     1501 acagccggct acaacctgga ccaagtcctt gaacagggag gtgtgtccag tttgtttcag
     1561 aatctcgggg tgtccgtaac tccgatccaa aggattgtcc tgagcggtga aaatgggctg
     1621 aagatcgaca tccatgtcat catcccgtat gaaggtctga gcggcgacca aatgggccag
     1681 atcgaaaaaa tttttaaggt ggtgtaccct gtggatgatc atcactttaa ggtgatcctg
     1741 cactatggca cactggtaat cgacggggtt acgccgaaca tgatcgacta tttcggacgg
     1801 ccgtatgaag gcatcgccgt gttcgacggc aaaaagatca ctgtaacagg gaccctgtgg
     1861 aacggcaaca aaattatcga cgagcgcctg atcaaccccg acggctccct gctgttccga
     1921 gtaaccatca acggagtgac cggctggcgg ctgtgcgaac gcattctggc gtaaggccgc
     1981 gactctagag tcgacctgca ggcatgcaag ctgatccggc tgctaacaaa gcccgaaagg
     2041 aagctgagtt ggctgctgcc accgctgagc aataactagc ataacccctt ggggcggccg
     2101 cttcgagcag acatgataag atacattgat gagtttggac aaaccacaac tagaatgcag
     2161 tgaaaaaaat gctttatttg tgaaatttgt gatgctattg ctttatttgt aaccattata
     2221 agctgcaata aacaagttaa caacaacaat tgcattcatt ttatgtttca ggttcagggg
     2281 gagatgtggg aggttttttt aagcaagtaa aacctctaca aatgtggtaa aatcgaattt
     2341 taacaaaata ttaacgctta caatttcctg atgcggtatt ttctccttac gcatctgtgc
     2401 ggtatttcac accgcatacg cggatctgcg cagcaccatg gcctgaaata acctctgaaa
     2461 gaggaacttg gttaggtacc ttctgaggcg gaaagaacca gctgtggaat gtgtgtcagt
     2521 tagggtgtgg aaagtcccca ggctccccag caggcagaag tatgcaaagc atgcatctca
     2581 attagtcagc aaccaggtgt ggaaagtccc caggctcccc agcaggcaga agtatgcaaa
     2641 gcatgcatct caattagtca gcaaccatag tcccgcccct aactccgccc atcccgcccc
     2701 taactccgcc cagttccgcc cattctccgc cccatggctg actaattttt tttatttatg
     2761 cagaggccga ggccgcctcg gcctctgagc tattccagaa gtagtgagga ggcttttttg
     2821 gaggcctagg cttttgcaaa aagcttaatt aactgttgac aattaatcat cggcatagta
     2881 tatcggcata gtataatacg acaaggtgag gaactaaacc caggaggcag atcatgattg
     2941 aacaagatgg attgcacgca ggttctccgg ccgcttgggt ggagaggcta ttcggctatg
     3001 actgggcaca acagacaatc ggctgctctg atgccgccgt gttccggctg tcagcgcagg
     3061 ggcgcccggt tctttttgtc aagaccgacc tgtccggtgc cctgaatgaa ctgcaggacg
     3121 aggcagcgcg gctatcgtgg ctggccacga cgggcgttcc ttgcgcagct gtgctcgacg
     3181 ttgtcactga agcgggaagg gactggctgc tattgggcga agtgccgggg caggatctcc
     3241 tgtcatctca ccttgctcct gccgagaaag tatccatcat ggctgatgca atgcggcggc
     3301 tgcatacgct tgatccggct acctgcccat tcgaccacca agcgaaacat cgcatcgagc
     3361 gagcacgtac tcggatggaa gccggtcttg tcgatcagga tgatctggac gaagagcatc
     3421 aggggctcgc gccagccgaa ctgttcgcca ggctcaaggc gcgcatgccc gacggcgagg
     3481 atctcgtcgt gacccatggc gatgcctgct tgccgaatat catggtggaa aatggccgct
     3541 tttctggatt catcgactgt ggccggctgg gtgtggcgga ccgctatcag gacatagcgt
     3601 tggctacccg tgatattgct gaagagcttg gcggcgaatg ggctgaccgc ttcctcgtgc
     3661 tttacggtat cgccgctccc gattcgcagc gcatcgcctt ctatcgcctt cttgacgagt
     3721 tcttctgagc gggactctgg ggttcgaaat gaccgaccaa gcgacgccca acctgccatc
     3781 acgatggccg caataaaata tctttatttt cattacatct gtgtgttggt tttttgtgtg
     3841 aatcgatagc gataaggatc ctctttgcgc ttgcgttttc ccttgtccag atagcccagt
     3901 agctgacatt catccggggt cagcaccgtt tctgcggact ggctttctac ccggtatcag
     3961 ctcactcaaa ggcggtaata cggttatcca cagaatcagg ggataacgca ggaaagaaca
     4021 tgtgagcaaa aggccagcaa aaggccagga accgtaaaaa ggccgcgttg ctggcgtttt
     4081 tccataggct ccgcccccct gacgagcatc acaaaaatcg acgctcaagt cagaggtggc
     4141 gaaacccgac aggactataa agataccagg cgtttccccc tggaagctcc ctcgtgcgct
     4201 ctcctgttcc gaccctgccg cttaccggat acctgtccgc ctttctccct tcgggaagcg
     4261 tggcgctttc tcatagctca cgctgtaggt atctcagttc ggtgtaggtc gttcgctcca
     4321 agctgggctg tgtgcacgaa ccccccgttc agcccgaccg ctgcgcctta tccggtaact
     4381 atcgtcttga gtccaacccg gtaagacacg acttatcgcc actggcagca gccactggta
     4441 acaggattag cagagcgagg tatgtaggcg gtgctacaga gttcttgaag tggtggccta
     4501 actacggcta cactagaagg acagtatttg gtatctgcgc tctgctgaag ccagttacct
     4561 tcggaaaaag agttggtagc tcttgatccg gcaaacaaac caccgctggt agcggtggtt
     4621 tttttgtttg caagcagcag attacgcgca gaaaaaaagg atttcaagaa gatcctttga
     4681 tcttttctac ggggtctgac gctcagtgga acgaaaactc acgttaaggg attttggtca
     4741 tgagattatc aaaaaggatc ttcacctaga tccttttata gtccggaaat acaggaacgc
     4801 acgctggatg gcccttcgct gggatggtga aaccatgaaa aatggcagct tcagtggatt
     4861 aagtgggggt aatgtggcct gtaccctctg gttgcatagg tattcatacg gttaaaattt
     4921 atcaggcgcg attgcggcag tttttcgggt ggtttgttgc catttttacc tgtctgctgc
     4981 cgtgatcgcg ctgaacgcgt tttagcggtg cgtacaatta agggattatg gtaaatccac
     5041 ttactgtctg ccctcgtagc catcgagata aaccgcagta ctccggccac gatgcgtccg
     5101 gcgtagagga tcgagatct
//

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