pHT43

价格:2000元

联系方式:I47-825O-882O

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载体基本信息

出品公司: MoBiTec GmbH, Germany
载体名称: pHT43
质粒类型: 枯草芽孢杆菌表达载体
高拷贝/低拷贝: 高拷贝
启动子: Pgrac
克隆方法: 多克隆位点,限制性内切酶
载体大小: 8057bp
5' 测序引物及序列: LacI-R:GGCATACTCTGCGACATCGT
3' 测序引物及序列: --
载体标签: N-amyQ
载体抗性: 氨苄和氯霉素
筛选标记: --
备注: pHT43载体通过IPTG诱导,能够高水平分泌表达目的蛋白。
产品目录号: pBS002
稳定性: 瞬时表达
组成型: 诱导型
病毒/非病毒: 非病毒

载体图谱质粒图谱和多克隆位点信息

pHT43载体图谱



pHT43多克隆位点

载体简介

1.简介
革兰氏阳性菌因其在农业,医疗和食品生物技术和重组蛋白生产等方面的贡献而广为人知。在所有革兰氏阳性菌中,枯草芽孢杆菌载体因下列原因尤为引人瞩目。(一)无致病性,且一般认为安全的有机体;(二)无明显的密码子偏好性;(三)可直接将功能性胞外蛋白分泌到培养基中(目前,大约60%的市售酶由芽孢杆菌生产);(四)具备包含转录,翻译,蛋白质折叠、分泌机制,遗传操作和大规模发酵的大信息量机体。

但是下述两个障碍减少了枯草芽孢杆菌的使用:(一)产生一定数目的识别并降解外源蛋白的胞外蛋白酶;(二)载体质粒稳定性。第一个障碍已因蛋白酶缺失株的构建而基本解决 。第二个因引入使用θ-复制模式质粒被完全克服,如由天然质粒pAMβ1和pBS72衍生的一些质粒(Jannière等,1990;Titok等,2003)。

最近,基于大肠杆菌 - 枯草杆菌穿梭质粒pMTLBS72的四种不同表达载体的构建和使用展示出全面的结构稳定性,业已出版(Nguyen等,2005)。

两个新的载体pHT01和pHT43允许在细胞质中高水平表达重组蛋白,其中pHT43载体引导重组蛋白到培养基。这两个载体基于强σA-依赖性启动子的枯草杆菌groE操纵子通过添加lac操纵子改造成为一种高效可控的(IPTG诱导的)启动子。pHT01衍生载体可与8×His标签(pHT08),链球菌标签(pHT9)或C - Myc的标签(pHT10)相结合。

2. pHT 载体
所有在枯草芽孢杆菌的groESL操纵子之前使强启动子与lac操纵子融合的载体都可通过加入IPTG进行诱导。尽管当未添加诱导物时表达组件的背景表达水平很低,还是成功从约1300种诱导因子中筛选出一种来使用bgaB报道基因(Phan等,2005)。当分别将htpG和pbpE基因融合到groE启动子时,加入IPTG后,表达的重组蛋白可能分别占细胞总蛋白的10%和13%(Phan等,2005)。热纤梭菌的amyQα-淀粉酶和纤维素酶A、B的高水平表达实验证实。该载体还插入了一个高效SD序列以及一个多克隆位点(BamH I, Xba I, Aat II, Sma I)。编码α-淀粉酶的amyQ基因的信号肽编码区域与pHT01的SD序列融合,构成了pHT43,以此获得分泌的重组蛋白。

载体序列

LOCUS       pHT43                   8057 bp    DNA     circular     12-JAN-2014
SOURCE      
  ORGANISM  
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            http://www.biofeng.com/
COMMENT     VNTAUTHORNAME|biofeng.com|
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ORIGIN
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     2461 gcttgaacaa tcacgaaaca ataattggta cgtacgatct ttcagccgac tcaaacatca 
     2521 aatcttacaa atgtagtctt tgaaagtatt acatatgtaa gatttaaatg caaccgtttt 
     2581 ttcggaagga aatgatgacc tcgtttccac cggaattagc ttggtaccag ctattgtaac 
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     2701 gtgaaaaatt ttttatctta tcacttgaaa ttggaaggga gattctttat tataagaatt 
     2761 gtggaattgt gagcggataa caattcccaa ttaaaggagg aaggatcaat gattcaaaaa 
     2821 cgaaagcgga cagtttcgtt cagacttgtg cttatgtgca cgctgttatt tgtcagtttg 
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     3601 ttaaaaaaaa gaaccaacaa aggctgagac agactccaaa cgagtctgtt tttttaaaaa 
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     3961 ttaggtgatc gcggagggac attatgagtg aagtaaacct aaaaggaaat acagatgaat 
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     4261 cgctctatgc tcacctaact cgttatgcat acggcagcaa agacttttgc tttcctagtc 
     4321 tacaaacaat cgctaaaaaa atggacaaga ctcctgttac agttagaggc tacttgaaac 
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//

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