pNLF1-secN [CMV/Hygro]

价格:1500元

联系方式:I47-825O-882O

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载体基本信息

出品公司: Promega
载体名称: pNLF1-secN ; pNLF1-secN [CMV/Hygro]
质粒类型: 哺乳动物载体;NanoLuc素酶报告载体
高拷贝/低拷贝: --
克隆方法: 限制性内切酶,多克隆位点
启动子: CMV IE
载体大小: 6005 bp
5' 测序引物及序列: T7 Forward:TAATACGACTCACTATAGGG
3' 测序引物及序列: --
载体标签: NanoLuc
载体抗性: 氨苄青霉素
筛选标记: 潮霉素(Hygromycin)
克隆菌株: TOP10等常规菌株
宿主细胞(系): 常规哺乳动物细胞等
备注: pNLF1-secN [CMV/Hygro]载体表达NanoLuc融合蛋白;NanoLuc萤光素酶(Nluc)更小(19.1kDa)、更亮(比萤火虫和海肾萤光素酶亮度高 100 倍)。
产品目录号: N1371
稳定性: 瞬表达或稳表达
组成型/诱导型: 组成型
病毒/非病毒: 非病毒

载体质粒图谱和多克隆位点信息

pNLF1-secN [CMV Hygro]载体图谱



pNLF1-secN [CMV/Hygro] Vector sequence reference points:

Base pairs                                                   6005
CMV immediate early enhancer/promoter                        1–742
Chimeric intron                                              857–989
T7 RNA polymerase promoter                                   1033–1052
secNanoLuc® protein coding region                            1067–1663
Linker                                                       1664–1675
Multiple cloning region                                      1676–1751
SV40 late poly(A) region                                     1814–2035
SV40 early enhancer/promoter                                 2134–2546
Synthetic hygromycin (Hygr) coding region                    2577–3614
Synthetic poly(A) signal                                     3638–3686
β-lactamase (Ampr) coding region                             3947–4807
ColE1-derived plasmid replication origin                     4962–4998

载体简介

NanoLuc萤光素酶融合表达载体pNLF1-secN

更小(19.1kDa)、更亮(比萤火虫和海肾萤光素酶亮度高 100 倍)的 NanoLuc萤光素酶(Nluc)非常适用于蛋白融合应用。NanoLuc 融合蛋白应用广泛:作为蛋白稳定性报告基因、生物发光法细胞成像(BLI)探针或作为供体信号用于生物发光共振能量转移(BRET)研究蛋白: 蛋白或蛋白: 小分子相互作用研究。
NanoLuc 蛋白融合载体可方便的 N- 或 C-端融合 Nluc 和您感兴趣蛋白的融合蛋白;有两类形式载体可供选择:
pNLF 载体系列:产生 N- 或 C- 端融合全长 Nluc 的融合蛋白或应用传统的克隆方法(多克隆位点)将分泌型 Nluc 克隆到感兴趣的蛋白 N 端。 
pF 载体系列:使用 Flexi Vector Cloning System 产生 N- 端或 C- 端融合蛋白;Flexi Vector Cloning System 是一种直接克隆方法,基于两种稀有酶切位点 SgfI 和 PmeI,可以在 Flexi 载体之间转换蛋白编码序列,快速、高效和高保真。

特点 - 优点
 轻松定量蛋白丰度变化:使用 Nano-Glo Luciferase Assay System 进行单一试剂加样,来定量 NanoLuc 融合蛋白的信号,进而检测细胞内蛋白水平。
 生物相关性更高:NanoLuc 报告基因光信号更强,内源性表达水平的 NanoLuc 融合蛋白即可被检测到,可避免过度表达造成的假象。
 使蛋白的细胞内动态变化可视化:NanoLuc 报告基因光信号更强,缩短了成像曝光时间,无需反复激发样本,从而降低了激发造成的细胞毒性反应。
 改进 BRET 研究技术:NanoLuc 拥有更强的光信号,蓝移的发射光谱,因而与荧光受体的光谱交叉更少,信噪比更佳,动态范围更宽。
 灵活的克隆选择:可使用传统克隆方法或 Flexi 克隆系统轻松将 NanoLuc 与目标蛋白的 C 端或 N 端融合。
 可实现从瞬时转染到稳定转染的轻松过渡:所有载体都含有用于建立稳定细胞系的哺乳动物筛选标志物。

应用
 化合物筛选
 蛋白: 蛋白相互作用
 蛋白: 小分子相互作用
 生物发光成像
 蛋白稳定性研究

载体序列

LOCUS       KF811459                6005 bp    DNA     circular SYN 03-FEB-2014
DEFINITION  SecN CMV-Hyg Vector pNLF1, complete sequence.
ACCESSION   KF811459
VERSION     KF811459.1  GI:576890577
KEYWORDS    .
SOURCE      secN CMV-Hyg Vector pNLF1
  ORGANISM  secN CMV-Hyg Vector pNLF1
            other sequences; artificial sequences; vectors.
REFERENCE   1  (bases 1 to 6005)
  AUTHORS   McNamara,B., Kopish,K. and Robers,M.
  TITLE     Direct Submission
  JOURNAL   Submitted (06-NOV-2013) Scientific Communications, Promega
            Corporation, 5500 E. Cheryl Parkway, Madison, WI 53711, USA
FEATURES             Location/Qualifiers
     source          1..6005
                     /organism="secN CMV-Hyg Vector pNLF1"
                     /mol_type="other DNA"
                     /db_xref="taxon:1454403"
     regulatory      1..6005
                     /regulatory_class="promoter"
                     /note="CMV promoter"
     intron          857..989
                     /note="chimeric"
     regulatory      1033..1052
                     /regulatory_class="promoter"
                     /note="T7 promoter"
     CDS             1067..>1663
                     /note="N-terminus"
                     /codon_start=1
                     /transl_table=11
                     /product="NanoLuc luciferase"
                     /protein_id="AHH41365.1"
                     /db_xref="GI:576890580"
                     /translation="MNSFSTSAFGPVAFSLGLLLVLPAAFPAPVFTLEDFVGDWRQTA
                     GYNLDQVLEQGGVSSLFQNLGVSVTPIQRIVLSGENGLKIDIHVIIPYEGLSGDQMGQ
                     IEKIFKVVYPVDDHHFKVILHYGTLVIDGVTPNMIDYFGRPYEGIAVFDGKKITVTGT
                     LWNGNKIIDERLINPDGSLLFRVTINGVTGWRLCERILA"
     misc_feature    1067..1153
                     /note="IL6 signal sequence"
     misc_feature    1664..1675
                     /note="N-terminal NanoLuc linker"
     misc_feature    1676..1751
                     /note="multiple cloning region"
     misc_feature    1676..1683
                     /note="SgfI site"
     misc_feature    1695..1700
                     /note="EcoICRI site"
     regulatory      1814..2035
                     /regulatory_class="polyA_signal_sequence"
                     /note="SV40 late polyA signal"
     regulatory      2134..2546
                     /regulatory_class="promoter"
                     /note="SV40 early enhancer/promoter"
     gene            2577..3614
                     /gene="hygR"
     CDS             2577..3614
                     /gene="hygR"
                     /codon_start=1
                     /transl_table=11
                     /product="hygromycin resistance protein"
                     /protein_id="AHH41364.1"
                     /db_xref="GI:576890579"
                     /translation="MKKPELTATSVEKFLIEKFDSVSDLMQLSEGEESRAFSFDVGGR
                     GYVLRVNSCADGFYKDRYVYRHFASAALPIPEVLDIGEFSESLTYCISRRAQGVTLQD
                     LPETELPAVLQPVAEAMDAIAAADLSQTSGFGPFGPQGIGQYTTWRDFICAIADPHVY
                     HWQTVMDDTVSASVAQALDELMLWAEDCPEVRHLVHADFGSNNVLTDNGRITAVIDWS
                     EAMFGDSQYEVANIFFWRPWLACMEQQTRYFERRHPELAGSPRLRAYMLRIGLDQLYQ
                     SLVDGNFDDAAWAQGRCDAIVRSGAGTVGRTQIARRSAAVWTDGCVEVLADSGNRRPS
                     TRPRAKEVGRV"
     regulatory      3638..3686
                     /regulatory_class="polyA_signal_sequence"
                     /note="synthetic polyA signal"
     gene            3947..4807
                     /gene="ampR"
     CDS             3947..4807
                     /gene="ampR"
                     /function="resistance to ampicillin"
                     /note="ampicillin-resistance protein"
                     /codon_start=1
                     /transl_table=11
                     /product="beta-lactamase"
                     /protein_id="AHH41363.1"
                     /db_xref="GI:576890578"
                     /translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGY
                     IELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVE
                     YSPVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRL
                     DRWEPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPL
                     LRSALPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIA
                     EIGASLIKHW"
     rep_origin      4962..4998
                     /note="ColE1-derived plasmid replication origin"
ORIGIN      
        1 tcaatattgg ccattagcca tattattcat tggttatata gcataaatca atattggcta
       61 ttggccattg catacgttgt atctatatca taatatgtac atttatattg gctcatgtcc
      121 aatatgaccg ccatgttggc attgattatt gactagttat taatagtaat caattacggg
      181 gtcattagtt catagcccat atatggagtt ccgcgttaca taacttacgg taaatggccc
      241 gcctggctga ccgcccaacg acccccgccc attgacgtca ataatgacgt atgttcccat
      301 agtaacgcca atagggactt tccattgacg tcaatgggtg gagtatttac ggtaaactgc
      361 ccacttggca gtacatcaag tgtatcatat gccaagtccg ccccctattg acgtcaatga
      421 cggtaaatgg cccgcctggc attatgccca gtacatgacc ttacgggact ttcctacttg
      481 gcagtacatc tacgtattag tcatcgctat taccatggtg atgcggtttt ggcagtacac
      541 caatgggcgt ggatagcggt ttgactcacg gggatttcca agtctccacc ccattgacgt
      601 caatgggagt ttgttttggc accaaaatca acgggacttt ccaaaatgtc gtaataaccc
      661 cgccccgttg acgcaaatgg gcggtaggcg tgtacggtgg gaggtctata taagcagagc
      721 tggtttagtg aaccgtcaga tcactagaag ctttattgcg gtagtttatc acagttaaat
      781 tgctaacgca gtcagtgctt ctgacacaac agtctcgaac ttaagctgca gaagttggtc
      841 gtgaggcact gggcaggtaa gtatcaaggt tacaagacag gtttaaggag accaatagaa
      901 actgggcttg tcgagacaga gaagactctt gcgtttctga taggcaccta ttggtcttac
      961 tgacatccac tttgcctttc tctccacagg tgtccactcc cagttcaatt acagctctta
     1021 aggctagagt attaatacga ctcactatag ggctagcaaa gccaccatga actccttctc
     1081 cacaagcgcc ttcggtccag ttgccttctc cctgggcctg ctcctggtgt tgcctgctgc
     1141 cttccctgcc ccagtcttca cactcgaaga tttcgttggg gactggcgac agacagccgg
     1201 ctacaacctg gaccaagtcc ttgaacaggg aggtgtgtcc agtttgtttc agaatctcgg
     1261 ggtgtccgta actccgatcc aaaggattgt cctgagcggt gaaaatgggc tgaagatcga
     1321 catccatgtc atcatcccgt atgaaggtct gagcggcgac caaatgggcc agatcgaaaa
     1381 aatttttaag gtggtgtacc ctgtggatga tcatcacttt aaggtgatcc tgcactatgg
     1441 cacactggta atcgacgggg ttacgccgaa catgatcgac tatttcggac ggccgtatga
     1501 aggcatcgcc gtgttcgacg gcaaaaagat cactgtaaca gggaccctgt ggaacggcaa
     1561 caaaattatc gacgagcgcc tgatcaaccc cgacggctcc ctgctgttcc gagtaaccat
     1621 caacggagtg accggctggc ggctgtgcga acgcattctg gcgggctcga gcggcgcgat
     1681 cgcttccgaa ttcagagctc aaccgcggat atctagattt gggcccaatt cctgcaggat
     1741 tttgcggccg cttgctgagt tggctgctgc caccgctgag caataactag cataacccct
     1801 tggccgcttc gagcagacat gataagatac attgatgagt ttggacaaac cacaactaga
     1861 atgcagtgaa aaaaatgctt tatttgtgaa atttgtgatg ctattgcttt atttgtaacc
     1921 attataagct gcaataaaca agttaacaac aacaattgca ttcattttat gtttcaggtt
     1981 cagggggaga tgtgggaggt ttttttaagc aagtaaaacc tctacaaatg tggtaaaatc
     2041 gaattttaac aaaatattaa cgcttacaat ttcctgatgc ggtattttct ccttacgcat
     2101 ctgtgcggta tttcacaccg catacgcgga tctgcgcagc accatggcct gaaataacct
     2161 ctgaaagagg aacttggtta ggtaccttct gaggcggaaa gaaccagctg tggaatgtgt
     2221 gtcagttagg gtgtggaaag tccccaggct ccccagcagg cagaagtatg caaagcatgc
     2281 atctcaatta gtcagcaacc aggtgtggaa agtccccagg ctccccagca ggcagaagta
     2341 tgcaaagcat gcatctcaat tagtcagcaa ccatagtccc gcccctaact ccgcccatcc
     2401 cgcccctaac tccgcccagt tccgcccatt ctccgcccca tggctgacta atttttttta
     2461 tttatgcaga ggccgaggcc gcctcggcct ctgagctatt ccagaagtag tgaggaggct
     2521 tttttggagg cctaggcttt tgcaaaaagc tcgattcttc tgacactagc gccaccatga
     2581 agaagcccga actcaccgct accagcgttg aaaaatttct catcgagaag ttcgacagtg
     2641 tgagcgacct gatgcagttg tcggagggcg aagagagccg agccttcagc ttcgatgtcg
     2701 gcggacgcgg ctatgtactg cgggtgaata gctgcgctga tggcttctac aaagaccgct
     2761 acgtgtaccg ccacttcgcc agcgctgcac tacccatccc cgaagtgttg gacatcggcg
     2821 agttcagcga gagcctgaca tactgcatca gtagacgcgc ccaaggcgtt actctccaag
     2881 acctccccga aacagagctg cctgctgtgt tacagcctgt cgccgaagct atggatgcta
     2941 ttgccgccgc cgacctcagt caaaccagcg gcttcggccc attcgggccc caaggcatcg
     3001 gccagtacac aacctggcgg gatttcattt gcgccattgc tgatccccat gtctaccact
     3061 ggcagaccgt gatggacgac accgtgtccg ccagcgtagc tcaagccctg gacgaactga
     3121 tgctgtgggc cgaagactgt cccgaggtgc gccacctcgt ccatgccgac ttcggcagca
     3181 acaacgtcct gaccgacaac ggccgcatca ccgccgtaat cgactggtcc gaagctatgt
     3241 tcggggacag tcagtacgag gtggccaaca tcttcttctg gcggccctgg ctggcttgca
     3301 tggagcagca gactcgctac ttcgagcgcc ggcatcccga gctggccggc agccctcgtc
     3361 tgcgagccta catgctgcgc atcggcctgg atcagctcta ccagagcctc gtggacggca
     3421 acttcgacga tgctgcctgg gctcaaggcc gctgcgatgc catcgtccgc agcggggccg
     3481 gcaccgtcgg tcgcacacaa atcgctcgcc ggagcgcagc cgtatggacc gacggctgcg
     3541 tcgaggtgct ggccgacagc ggcaaccgcc ggcccagtac acgaccgcgc gctaaggagg
     3601 taggtcgagt ttagactcta gccatcacga tggccgcaat aaaatatctt tattttcatt
     3661 acatctgtgt gttggttttt tgtgtgaatc gatagcgata aggatcctct ttgcgcttgc
     3721 gttttccctt gtccagatag cccagtagct gacattcatc cggggtcagc accgtttctg
     3781 cggactggct ttctacgtaa tggtttctta gacgtcaggt ggcacttttc ggggaaatgt
     3841 gcgcggaacc cctatttgtt tatttttcta aatacattca aatatgtatc cgctcatgag
     3901 acaataaccc tgataaatgc ttcaataata ttgaaaaagg aagagtatga gtattcaaca
     3961 tttccgtgtc gcccttattc ccttttttgc ggcattttgc cttcctgttt ttgctcaccc
     4021 agaaacgctg gtgaaagtaa aagatgctga agatcagttg ggtgcacgag tgggttacat
     4081 cgaactggat ctcaacagcg gtaagatcct tgagagtttt cgccccgaag aacgttttcc
     4141 aatgatgagc actttcaaag ttctgctatg tggcgcggta ttatcccgta ttgacgccgg
     4201 gcaagagcaa ctcggtcgcc gcatacacta ttctcagaat gacttggttg agtactcacc
     4261 agtcacagaa aagcatctta cggatggcat gacagtaaga gaattatgca gtgctgccat
     4321 aaccatgagt gataacactg cggccaactt acttctgaca actatcggag gaccgaagga
     4381 gctaaccgct tttttgcaca acatggggga tcatgtaact cgccttgatc gttgggaacc
     4441 ggagctgaat gaagccatac caaacgacga gcgtgacacc acgatgcctg tagcaatggc
     4501 aacaacgttg cgcaaactat taactggcga actacttact ctagcttccc ggcaacaatt
     4561 aatagactgg atggaggcgg ataaagttgc aggaccactt ctgcgctcgg cccttccggc
     4621 tggctggttt attgctgata aatctggagc cggtgagcgt gggtctcgcg gtatcattgc
     4681 agcactgggg ccagatggta agccctcccg tatcgtagtt atctacacga cggggagtca
     4741 ggcaactatg gatgaacgaa atagacagat cgctgagata ggtgcctcac tgattaagca
     4801 ttggtaattc gaaatgaccg accaagcgac gcccaaccgg tatcagctca ctcaaaggcg
     4861 gtaatacggt tatccacaga atcaggggat aacgcaggaa agaacatgtg agcaaaaggc
     4921 cagcaaaagg ccaggaaccg taaaaaggcc gcgttgctgg cgtttttcca taggctccgc
     4981 ccccctgacg agcatcacaa aaatcgacgc tcaagtcaga ggtggcgaaa cccgacagga
     5041 ctataaagat accaggcgtt tccccctgga agctccctcg tgcgctctcc tgttccgacc
     5101 ctgccgctta ccggatacct gtccgccttt ctcccttcgg gaagcgtggc gctttctcat
     5161 agctcacgct gtaggtatct cagttcggtg taggtcgttc gctccaagct gggctgtgtg
     5221 cacgaacccc ccgttcagcc cgaccgctgc gccttatccg gtaactatcg tcttgagtcc
     5281 aacccggtaa gacacgactt atcgccactg gcagcagcca ctggtaacag gattagcaga
     5341 gcgaggtatg taggcggtgc tacagagttc ttgaagtggt ggcctaacta cggctacact
     5401 agaaggacag tatttggtat ctgcgctctg ctgaagccag ttaccttcgg aaaaagagtt
     5461 ggtagctctt gatccggcaa acaaaccacc gctggtagcg gtggtttttt tgtttgcaag
     5521 cagcagatta cgcgcagaaa aaaaggattt caagaagatc ctttgatctt ttctacgggg
     5581 tctgacgctc agtggaacga aaactcacgt taagggattt tggtcatgag attatcaaaa
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