pNLF1-N [CMV/Hygro]

价格:1500元

联系方式:I47-825O-882O

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pNLF1-N载体基本信息

出品公司: Promega
载体名称: pNLF1-N ; pNLF1-N [CMV/Hygro]
质粒类型: 哺乳动物载体;NanoLuc素酶报告载体
高拷贝/低拷贝: --
克隆方法: 限制性内切酶,多克隆位点
启动子: CMV IE
载体大小: 5919 bp
5' 测序引物及序列: T7 Forward:TAATACGACTCACTATAGGG
3' 测序引物及序列: --
载体标签: NanoLuc
载体抗性: 氨苄青霉素
筛选标记: 潮霉素(Hygromycin)
克隆菌株: TOP10等常规菌株
宿主细胞(系): 常规哺乳动物细胞等
备注: pNLF1-N [CMV/Hygro]载体表达NanoLuc融合蛋白;NanoLuc萤光素酶(Nluc)更小(19.1kDa)、更亮(比萤火虫和海肾萤光素酶亮度高 100 倍)。
产品目录号: N1351
稳定性: 瞬表达或稳表达
组成型/诱导型: 组成型
病毒/非病毒: 非病毒

pNLF1-N载体质粒图谱和多克隆位点信息

pNLF1-N [CMV Hygro]载体图谱



pNLF1-N载体图谱



CMV immediate early enhancer/promoter                        1–742
Chimeric intron                                              857–989
T7 RNA polymerase promoter (–17 to +3)                       1033–1052
NanoLuc® protein coding region                               1065–1577
Linker                                                       1578–1589
Multiple cloning region                                      1590–1665
SV40 late poly(A) region                                     1728–1949
SV40 early enhancer/promoter                                 2048–2460
Synthetic (Hygr) hygromycin coding region                    2491–3528
Synthetic poly(A) signal                                     3552–3600
β-lactamase (Ampr) coding region                             3861–4721
ColE1-derived plasmid replication origin                     4876–4912

pNLF1-N载体简介

NanoLuc萤光素酶融合表达载体pNLF1-N [CMV/Hygro]

更小(19.1kDa)、更亮(比萤火虫和海肾萤光素酶亮度高 100 倍)的 NanoLuc萤光素酶(Nluc)非常适用于蛋白融合应用。NanoLuc 融合蛋白应用广泛:作为蛋白稳定性报告基因、生物发光法细胞成像(BLI)探针或作为供体信号用于生物发光共振能量转移(BRET)研究蛋白: 蛋白或蛋白: 小分子相互作用研究。
NanoLuc 蛋白融合载体可方便的 N- 或 C-端融合 Nluc 和您感兴趣蛋白的融合蛋白;有两类形式载体可供选择:
pNLF 载体系列:产生 N- 或 C- 端融合全长 Nluc 的融合蛋白或应用传统的克隆方法(多克隆位点)将分泌型 Nluc 克隆到感兴趣的蛋白 N 端。 
pF 载体系列:使用 Flexi Vector Cloning System 产生 N- 端或 C- 端融合蛋白;Flexi Vector Cloning System 是一种直接克隆方法,基于两种稀有酶切位点 SgfI 和 PmeI,可以在 Flexi 载体之间转换蛋白编码序列,快速、高效和高保真。

特点 - 优点
 轻松定量蛋白丰度变化:使用 Nano-Glo Luciferase Assay System 进行单一试剂加样,来定量 NanoLuc 融合蛋白的信号,进而检测细胞内蛋白水平。
 生物相关性更高:NanoLuc 报告基因光信号更强,内源性表达水平的 NanoLuc 融合蛋白即可被检测到,可避免过度表达造成的假象。
 使蛋白的细胞内动态变化可视化:NanoLuc 报告基因光信号更强,缩短了成像曝光时间,无需反复激发样本,从而降低了激发造成的细胞毒性反应。
 改进 BRET 研究技术:NanoLuc 拥有更强的光信号,蓝移的发射光谱,因而与荧光受体的光谱交叉更少,信噪比更佳,动态范围更宽。
 灵活的克隆选择:可使用传统克隆方法或 Flexi 克隆系统轻松将 NanoLuc 与目标蛋白的 C 端或 N 端融合。
 可实现从瞬时转染到稳定转染的轻松过渡:所有载体都含有用于建立稳定细胞系的哺乳动物筛选标志物。

应用
 化合物筛选
 蛋白: 蛋白相互作用
 蛋白: 小分子相互作用
 生物发光成像
 蛋白稳定性研究

pNLF1-N载体序列

LOCUS       KF811457                5919 bp    DNA     circular SYN 03-FEB-2014
DEFINITION  N CMV-Hygro Vector pNLF1, complete sequence.
ACCESSION   KF811457
VERSION     KF811457.1  GI:576890569
KEYWORDS    .
SOURCE      N CMV-Hygro Vector pNLF1
  ORGANISM  N CMV-Hygro Vector pNLF1
            other sequences; artificial sequences; vectors.
REFERENCE   1  (bases 1 to 5919)
  AUTHORS   McNamara,B., Kopish,K. and Robers,M.
  TITLE     Direct Submission
  JOURNAL   Submitted (06-NOV-2013) Scientific Communications, Promega
            Corporation, 5500 E. Cheryl Parkway, Madison, WI 53711, USA
FEATURES             Location/Qualifiers
     source          1..5919
                     /organism="N CMV-Hygro Vector pNLF1"
                     /mol_type="other DNA"
                     /db_xref="taxon:1454397"
     regulatory      1..742
                     /regulatory_class="promoter"
                     /note="CMV immediate early enhancer promoter"
     intron          857..989
                     /note="chimeric"
     regulatory      1033..1052
                     /regulatory_class="promoter"
                     /note="T7 promoter"
     gene            1065..>1577
                     /gene="NLuc"
     CDS             1065..>1577
                     /gene="NLuc"
                     /note="N-terminus"
                     /codon_start=1
                     /transl_table=11
                     /product="NanoLuc luciferase"
                     /protein_id="AHH41358.1"
                     /db_xref="GI:576890571"
                     /translation="MVFTLEDFVGDWRQTAGYNLDQVLEQGGVSSLFQNLGVSVTPIQ
                     RIVLSGENGLKIDIHVIIPYEGLSGDQMGQIEKIFKVVYPVDDHHFKVILHYGTLVID
                     GVTPNMIDYFGRPYEGIAVFDGKKITVTGTLWNGNKIIDERLINPDGSLLFRVTINGV
                     TGWRLCERILA"
     misc_feature    1578..1589
                     /note="N-terminal NanoLuc linker"
     misc_feature    1590..1665
                     /note="multiple cloning region"
     misc_feature    1590..1597
                     /note="SgfI site"
     regulatory      1728..1949
                     /regulatory_class="polyA_signal_sequence"
                     /note="SV40 late polyA signal"
     regulatory      2048..2460
                     /regulatory_class="promoter"
                     /note="SV40 early enhancer/promoter"
     gene            2491..3528
                     /gene="hygR"
     CDS             2491..3528
                     /gene="hygR"
                     /codon_start=1
                     /transl_table=11
                     /product="hygromycin resistance protein"
                     /protein_id="AHH41357.1"
                     /db_xref="GI:576890570"
                     /translation="MKKPELTATSVEKFLIEKFDSVSDLMQLSEGEESRAFSFDVGGR
                     GYVLRVNSCADGFYKDRYVYRHFASAALPIPEVLDIGEFSESLTYCISRRAQGVTLQD
                     LPETELPAVLQPVAEAMDAIAAADLSQTSGFGPFGPQGIGQYTTWRDFICAIADPHVY
                     HWQTVMDDTVSASVAQALDELMLWAEDCPEVRHLVHADFGSNNVLTDNGRITAVIDWS
                     EAMFGDSQYEVANIFFWRPWLACMEQQTRYFERRHPELAGSPRLRAYMLRIGLDQLYQ
                     SLVDGNFDDAAWAQGRCDAIVRSGAGTVGRTQIARRSAAVWTDGCVEVLADSGNRRPS
                     TRPRAKEVGRV"
     regulatory      3552..3600
                     /regulatory_class="polyA_signal_sequence"
                     /note="synthetic polyA signal"
     gene            3861..4721
                     /gene="ampR"
     CDS             3861..4721
                     /gene="ampR"
                     /function="resistance to ampicillin"
                     /note="ampicillin-resistance protein; removed RE site from
                     beta-lactamase gene"
                     /codon_start=1
                     /transl_table=11
                     /product="beta-lactamase"
                     /protein_id="AHH41359.1"
                     /db_xref="GI:576890572"
                     /translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGY
                     IELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVE
                     YSPVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRL
                     DRWEPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPL
                     LRSALPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIA
                     EIGASLIKHW"
     rep_origin      4876..4912
                     /note="ColE1-derived plasmid replication origin"
ORIGIN      
        1 tcaatattgg ccattagcca tattattcat tggttatata gcataaatca atattggcta
       61 ttggccattg catacgttgt atctatatca taatatgtac atttatattg gctcatgtcc
      121 aatatgaccg ccatgttggc attgattatt gactagttat taatagtaat caattacggg
      181 gtcattagtt catagcccat atatggagtt ccgcgttaca taacttacgg taaatggccc
      241 gcctggctga ccgcccaacg acccccgccc attgacgtca ataatgacgt atgttcccat
      301 agtaacgcca atagggactt tccattgacg tcaatgggtg gagtatttac ggtaaactgc
      361 ccacttggca gtacatcaag tgtatcatat gccaagtccg ccccctattg acgtcaatga
      421 cggtaaatgg cccgcctggc attatgccca gtacatgacc ttacgggact ttcctacttg
      481 gcagtacatc tacgtattag tcatcgctat taccatggtg atgcggtttt ggcagtacac
      541 caatgggcgt ggatagcggt ttgactcacg gggatttcca agtctccacc ccattgacgt
      601 caatgggagt ttgttttggc accaaaatca acgggacttt ccaaaatgtc gtaataaccc
      661 cgccccgttg acgcaaatgg gcggtaggcg tgtacggtgg gaggtctata taagcagagc
      721 tggtttagtg aaccgtcaga tcactagaag ctttattgcg gtagtttatc acagttaaat
      781 tgctaacgca gtcagtgctt ctgacacaac agtctcgaac ttaagctgca gaagttggtc
      841 gtgaggcact gggcaggtaa gtatcaaggt tacaagacag gtttaaggag accaatagaa
      901 actgggcttg tcgagacaga gaagactctt gcgtttctga taggcaccta ttggtcttac
      961 tgacatccac tttgcctttc tctccacagg tgtccactcc cagttcaatt acagctctta
     1021 aggctagagt attaatacga ctcactatag ggctagcgct caccatggtc ttcacactcg
     1081 aagatttcgt tggggactgg cgacagacag ccggctacaa cctggaccaa gtccttgaac
     1141 agggaggtgt gtccagtttg tttcagaatc tcggggtgtc cgtaactccg atccaaagga
     1201 ttgtcctgag cggtgaaaat gggctgaaga tcgacatcca tgtcatcatc ccgtatgaag
     1261 gtctgagcgg cgaccaaatg ggccagatcg aaaaaatttt taaggtggtg taccctgtgg
     1321 atgatcatca ctttaaggtg atcctgcact atggcacact ggtaatcgac ggggttacgc
     1381 cgaacatgat cgactatttc ggacggccgt atgaaggcat cgccgtgttc gacggcaaaa
     1441 agatcactgt aacagggacc ctgtggaacg gcaacaaaat tatcgacgag cgcctgatca
     1501 accccgacgg ctccctgctg ttccgagtaa ccatcaacgg agtgaccggc tggcggctgt
     1561 gcgaacgcat tctggcgggc tcgagcggcg cgatcgcttc cgaattcaga gctcaaccgc
     1621 ggatatctag atttgggccc aattcctgca ggattttgcg gccgcttgct gagttggctg
     1681 ctgccaccgc tgagcaataa ctagcataac cccttggccg cttcgagcag acatgataag
     1741 atacattgat gagtttggac aaaccacaac tagaatgcag tgaaaaaaat gctttatttg
     1801 tgaaatttgt gatgctattg ctttatttgt aaccattata agctgcaata aacaagttaa
     1861 caacaacaat tgcattcatt ttatgtttca ggttcagggg gagatgtggg aggttttttt
     1921 aagcaagtaa aacctctaca aatgtggtaa aatcgaattt taacaaaata ttaacgctta
     1981 caatttcctg atgcggtatt ttctccttac gcatctgtgc ggtatttcac accgcatacg
     2041 cggatctgcg cagcaccatg gcctgaaata acctctgaaa gaggaacttg gttaggtacc
     2101 ttctgaggcg gaaagaacca gctgtggaat gtgtgtcagt tagggtgtgg aaagtcccca
     2161 ggctccccag caggcagaag tatgcaaagc atgcatctca attagtcagc aaccaggtgt
     2221 ggaaagtccc caggctcccc agcaggcaga agtatgcaaa gcatgcatct caattagtca
     2281 gcaaccatag tcccgcccct aactccgccc atcccgcccc taactccgcc cagttccgcc
     2341 cattctccgc cccatggctg actaattttt tttatttatg cagaggccga ggccgcctcg
     2401 gcctctgagc tattccagaa gtagtgagga ggcttttttg gaggcctagg cttttgcaaa
     2461 aagctcgatt cttctgacac tagcgccacc atgaagaagc ccgaactcac cgctaccagc
     2521 gttgaaaaat ttctcatcga gaagttcgac agtgtgagcg acctgatgca gttgtcggag
     2581 ggcgaagaga gccgagcctt cagcttcgat gtcggcggac gcggctatgt actgcgggtg
     2641 aatagctgcg ctgatggctt ctacaaagac cgctacgtgt accgccactt cgccagcgct
     2701 gcactaccca tccccgaagt gttggacatc ggcgagttca gcgagagcct gacatactgc
     2761 atcagtagac gcgcccaagg cgttactctc caagacctcc ccgaaacaga gctgcctgct
     2821 gtgttacagc ctgtcgccga agctatggat gctattgccg ccgccgacct cagtcaaacc
     2881 agcggcttcg gcccattcgg gccccaaggc atcggccagt acacaacctg gcgggatttc
     2941 atttgcgcca ttgctgatcc ccatgtctac cactggcaga ccgtgatgga cgacaccgtg
     3001 tccgccagcg tagctcaagc cctggacgaa ctgatgctgt gggccgaaga ctgtcccgag
     3061 gtgcgccacc tcgtccatgc cgacttcggc agcaacaacg tcctgaccga caacggccgc
     3121 atcaccgccg taatcgactg gtccgaagct atgttcgggg acagtcagta cgaggtggcc
     3181 aacatcttct tctggcggcc ctggctggct tgcatggagc agcagactcg ctacttcgag
     3241 cgccggcatc ccgagctggc cggcagccct cgtctgcgag cctacatgct gcgcatcggc
     3301 ctggatcagc tctaccagag cctcgtggac ggcaacttcg acgatgctgc ctgggctcaa
     3361 ggccgctgcg atgccatcgt ccgcagcggg gccggcaccg tcggtcgcac acaaatcgct
     3421 cgccggagcg cagccgtatg gaccgacggc tgcgtcgagg tgctggccga cagcggcaac
     3481 cgccggccca gtacacgacc gcgcgctaag gaggtaggtc gagtttagac tctagccatc
     3541 acgatggccg caataaaata tctttatttt cattacatct gtgtgttggt tttttgtgtg
     3601 aatcgatagc gataaggatc ctctttgcgc ttgcgttttc ccttgtccag atagcccagt
     3661 agctgacatt catccggggt cagcaccgtt tctgcggact ggctttctac gtaatggttt
     3721 cttagacgtc aggtggcact tttcggggaa atgtgcgcgg aacccctatt tgtttatttt
     3781 tctaaataca ttcaaatatg tatccgctca tgagacaata accctgataa atgcttcaat
     3841 aatattgaaa aaggaagagt atgagtattc aacatttccg tgtcgccctt attccctttt
     3901 ttgcggcatt ttgccttcct gtttttgctc acccagaaac gctggtgaaa gtaaaagatg
     3961 ctgaagatca gttgggtgca cgagtgggtt acatcgaact ggatctcaac agcggtaaga
     4021 tccttgagag ttttcgcccc gaagaacgtt ttccaatgat gagcactttc aaagttctgc
     4081 tatgtggcgc ggtattatcc cgtattgacg ccgggcaaga gcaactcggt cgccgcatac
     4141 actattctca gaatgacttg gttgagtact caccagtcac agaaaagcat cttacggatg
     4201 gcatgacagt aagagaatta tgcagtgctg ccataaccat gagtgataac actgcggcca
     4261 acttacttct gacaactatc ggaggaccga aggagctaac cgcttttttg cacaacatgg
     4321 gggatcatgt aactcgcctt gatcgttggg aaccggagct gaatgaagcc ataccaaacg
     4381 acgagcgtga caccacgatg cctgtagcaa tggcaacaac gttgcgcaaa ctattaactg
     4441 gcgaactact tactctagct tcccggcaac aattaataga ctggatggag gcggataaag
     4501 ttgcaggacc acttctgcgc tcggcccttc cggctggctg gtttattgct gataaatctg
     4561 gagccggtga gcgtgggtct cgcggtatca ttgcagcact ggggccagat ggtaagccct
     4621 cccgtatcgt agttatctac acgacgggga gtcaggcaac tatggatgaa cgaaatagac
     4681 agatcgctga gataggtgcc tcactgatta agcattggta attcgaaatg accgaccaag
     4741 cgacgcccaa ccggtatcag ctcactcaaa ggcggtaata cggttatcca cagaatcagg
     4801 ggataacgca ggaaagaaca tgtgagcaaa aggccagcaa aaggccagga accgtaaaaa
     4861 ggccgcgttg ctggcgtttt tccataggct ccgcccccct gacgagcatc acaaaaatcg
     4921 acgctcaagt cagaggtggc gaaacccgac aggactataa agataccagg cgtttccccc
     4981 tggaagctcc ctcgtgcgct ctcctgttcc gaccctgccg cttaccggat acctgtccgc
     5041 ctttctccct tcgggaagcg tggcgctttc tcatagctca cgctgtaggt atctcagttc
     5101 ggtgtaggtc gttcgctcca agctgggctg tgtgcacgaa ccccccgttc agcccgaccg
     5161 ctgcgcctta tccggtaact atcgtcttga gtccaacccg gtaagacacg acttatcgcc
     5221 actggcagca gccactggta acaggattag cagagcgagg tatgtaggcg gtgctacaga
     5281 gttcttgaag tggtggccta actacggcta cactagaagg acagtatttg gtatctgcgc
     5341 tctgctgaag ccagttacct tcggaaaaag agttggtagc tcttgatccg gcaaacaaac
     5401 caccgctggt agcggtggtt tttttgtttg caagcagcag attacgcgca gaaaaaaagg
     5461 atttcaagaa gatcctttga tcttttctac ggggtctgac gctcagtgga acgaaaactc
     5521 acgttaaggg attttggtca tgagattatc aaaaaggatc ttcacctaga tccttttata
     5581 gtccggaaat acaggaacgc acgctggatg gcccttcgct gggatggtga aaccatgaaa
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