| 出品公司: | Promega |
|---|---|
| 载体名称: | pNLF1-N ; pNLF1-N [CMV/Hygro] |
| 质粒类型: | 哺乳动物载体；NanoLuc素酶报告载体 |
| 高拷贝/低拷贝: | -- |
| 克隆方法: | 限制性内切酶，多克隆位点 |
| 启动子: | CMV IE |
| 载体大小: | 5919 bp |
| 5' 测序引物及序列: | T7 Forward:TAATACGACTCACTATAGGG |
| 3' 测序引物及序列: | -- |
| 载体标签: | NanoLuc |
| 载体抗性: | 氨苄青霉素 |
| 筛选标记: | 潮霉素（Hygromycin） |
| 克隆菌株: | TOP10等常规菌株 |
| 宿主细胞（系）: | 常规哺乳动物细胞等 |
| 备注: | pNLF1-N [CMV/Hygro]载体表达NanoLuc融合蛋白；NanoLuc萤光素酶（Nluc）更小（19.1kDa）、更亮（比萤火虫和海肾萤光素酶亮度高 100 倍）。 |
| 产品目录号: | N1351 |
| 稳定性: | 瞬表达或稳表达 |
| 组成型/诱导型: | 组成型 |
| 病毒/非病毒: | 非病毒 |
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pNLF1-N [CMV/Hygro]载体pNLF1-N质粒基本信息
pNLF1-N [CMV/Hygro]质粒图谱pNLF1-N载体图谱和pNLF1-N [CMV/Hygro]载体序列pNLF1-N质粒序列多克隆位点信息
![pNLF1-N [CMV Hygro]载体图谱](/uploads/载体图谱/pNLF1-N [CMV Hygro] vector map.jpeg)
CMV immediate early enhancer/promoter 1–742
Chimeric intron 857–989
T7 RNA polymerase promoter (–17 to +3) 1033–1052
NanoLuc® protein coding region 1065–1577
Linker 1578–1589
Multiple cloning region 1590–1665
SV40 late poly(A) region 1728–1949
SV40 early enhancer/promoter 2048–2460
Synthetic (Hygr) hygromycin coding region 2491–3528
Synthetic poly(A) signal 3552–3600
β-lactamase (Ampr) coding region 3861–4721
ColE1-derived plasmid replication origin 4876–4912
pNLF1-N [CMV/Hygro]质粒pNLF1-N载体简介
NanoLuc萤光素酶融合表达载体pNLF1-N [CMV/Hygro]
更小（19.1kDa）、更亮（比萤火虫和海肾萤光素酶亮度高 100 倍）的 NanoLuc萤光素酶（Nluc）非常适用于蛋白融合应用。NanoLuc 融合蛋白应用广泛：作为蛋白稳定性报告基因、生物发光法细胞成像（BLI）探针或作为供体信号用于生物发光共振能量转移（BRET）研究蛋白: 蛋白或蛋白: 小分子相互作用研究。
NanoLuc 蛋白融合载体可方便的 N- 或 C-端融合 Nluc 和您感兴趣蛋白的融合蛋白；有两类形式载体可供选择：
pNLF 载体系列：产生 N- 或 C- 端融合全长 Nluc 的融合蛋白或应用传统的克隆方法（多克隆位点）将分泌型 Nluc 克隆到感兴趣的蛋白 N 端。
pF 载体系列：使用 Flexi Vector Cloning System 产生 N- 端或 C- 端融合蛋白；Flexi Vector Cloning System 是一种直接克隆方法，基于两种稀有酶切位点 SgfI 和 PmeI，可以在 Flexi 载体之间转换蛋白编码序列，快速、高效和高保真。
特点 - 优点
轻松定量蛋白丰度变化：使用 Nano-Glo Luciferase Assay System 进行单一试剂加样，来定量 NanoLuc 融合蛋白的信号，进而检测细胞内蛋白水平。
生物相关性更高：NanoLuc 报告基因光信号更强，内源性表达水平的 NanoLuc 融合蛋白即可被检测到，可避免过度表达造成的假象。
使蛋白的细胞内动态变化可视化：NanoLuc 报告基因光信号更强，缩短了成像曝光时间，无需反复激发样本，从而降低了激发造成的细胞毒性反应。
改进 BRET 研究技术：NanoLuc 拥有更强的光信号，蓝移的发射光谱，因而与荧光受体的光谱交叉更少，信噪比更佳，动态范围更宽。
灵活的克隆选择：可使用传统克隆方法或 Flexi 克隆系统轻松将 NanoLuc 与目标蛋白的 C 端或 N 端融合。
可实现从瞬时转染到稳定转染的轻松过渡：所有载体都含有用于建立稳定细胞系的哺乳动物筛选标志物。
应用
化合物筛选
蛋白: 蛋白相互作用
蛋白: 小分子相互作用
生物发光成像
蛋白稳定性研究
pNLF1-N [CMV/Hygro]质粒序列pNLF1-N载体序列
LOCUS KF811457 5919 bp DNA circular SYN 03-FEB-2014
DEFINITION N CMV-Hygro Vector pNLF1, complete sequence.
ACCESSION KF811457
VERSION KF811457.1 GI:576890569
KEYWORDS .
SOURCE N CMV-Hygro Vector pNLF1
ORGANISM N CMV-Hygro Vector pNLF1
other sequences; artificial sequences; vectors.
REFERENCE 1 (bases 1 to 5919)
AUTHORS McNamara,B., Kopish,K. and Robers,M.
TITLE Direct Submission
JOURNAL Submitted (06-NOV-2013) Scientific Communications, Promega
Corporation, 5500 E. Cheryl Parkway, Madison, WI 53711, USA
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..5919
/organism="N CMV-Hygro Vector pNLF1"
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RIVLSGENGLKIDIHVIIPYEGLSGDQMGQIEKIFKVVYPVDDHHFKVILHYGTLVID
GVTPNMIDYFGRPYEGIAVFDGKKITVTGTLWNGNKIIDERLINPDGSLLFRVTINGV
TGWRLCERILA"
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/note="SV40 late polyA signal"
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/note="SV40 early enhancer/promoter"
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CDS 2491..3528
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GYVLRVNSCADGFYKDRYVYRHFASAALPIPEVLDIGEFSESLTYCISRRAQGVTLQD
LPETELPAVLQPVAEAMDAIAAADLSQTSGFGPFGPQGIGQYTTWRDFICAIADPHVY
HWQTVMDDTVSASVAQALDELMLWAEDCPEVRHLVHADFGSNNVLTDNGRITAVIDWS
EAMFGDSQYEVANIFFWRPWLACMEQQTRYFERRHPELAGSPRLRAYMLRIGLDQLYQ
SLVDGNFDDAAWAQGRCDAIVRSGAGTVGRTQIARRSAAVWTDGCVEVLADSGNRRPS
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beta-lactamase gene"
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IELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVE
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DRWEPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPL
LRSALPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIA
EIGASLIKHW"
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ORIGIN
1 tcaatattgg ccattagcca tattattcat tggttatata gcataaatca atattggcta
61 ttggccattg catacgttgt atctatatca taatatgtac atttatattg gctcatgtcc
121 aatatgaccg ccatgttggc attgattatt gactagttat taatagtaat caattacggg
181 gtcattagtt catagcccat atatggagtt ccgcgttaca taacttacgg taaatggccc
241 gcctggctga ccgcccaacg acccccgccc attgacgtca ataatgacgt atgttcccat
301 agtaacgcca atagggactt tccattgacg tcaatgggtg gagtatttac ggtaaactgc
361 ccacttggca gtacatcaag tgtatcatat gccaagtccg ccccctattg acgtcaatga
421 cggtaaatgg cccgcctggc attatgccca gtacatgacc ttacgggact ttcctacttg
481 gcagtacatc tacgtattag tcatcgctat taccatggtg atgcggtttt ggcagtacac
541 caatgggcgt ggatagcggt ttgactcacg gggatttcca agtctccacc ccattgacgt
601 caatgggagt ttgttttggc accaaaatca acgggacttt ccaaaatgtc gtaataaccc
661 cgccccgttg acgcaaatgg gcggtaggcg tgtacggtgg gaggtctata taagcagagc
721 tggtttagtg aaccgtcaga tcactagaag ctttattgcg gtagtttatc acagttaaat
781 tgctaacgca gtcagtgctt ctgacacaac agtctcgaac ttaagctgca gaagttggtc
841 gtgaggcact gggcaggtaa gtatcaaggt tacaagacag gtttaaggag accaatagaa
901 actgggcttg tcgagacaga gaagactctt gcgtttctga taggcaccta ttggtcttac
961 tgacatccac tttgcctttc tctccacagg tgtccactcc cagttcaatt acagctctta
1021 aggctagagt attaatacga ctcactatag ggctagcgct caccatggtc ttcacactcg
1081 aagatttcgt tggggactgg cgacagacag ccggctacaa cctggaccaa gtccttgaac
1141 agggaggtgt gtccagtttg tttcagaatc tcggggtgtc cgtaactccg atccaaagga
1201 ttgtcctgag cggtgaaaat gggctgaaga tcgacatcca tgtcatcatc ccgtatgaag
1261 gtctgagcgg cgaccaaatg ggccagatcg aaaaaatttt taaggtggtg taccctgtgg
1321 atgatcatca ctttaaggtg atcctgcact atggcacact ggtaatcgac ggggttacgc
1381 cgaacatgat cgactatttc ggacggccgt atgaaggcat cgccgtgttc gacggcaaaa
1441 agatcactgt aacagggacc ctgtggaacg gcaacaaaat tatcgacgag cgcctgatca
1501 accccgacgg ctccctgctg ttccgagtaa ccatcaacgg agtgaccggc tggcggctgt
1561 gcgaacgcat tctggcgggc tcgagcggcg cgatcgcttc cgaattcaga gctcaaccgc
1621 ggatatctag atttgggccc aattcctgca ggattttgcg gccgcttgct gagttggctg
1681 ctgccaccgc tgagcaataa ctagcataac cccttggccg cttcgagcag acatgataag
1741 atacattgat gagtttggac aaaccacaac tagaatgcag tgaaaaaaat gctttatttg
1801 tgaaatttgt gatgctattg ctttatttgt aaccattata agctgcaata aacaagttaa
1861 caacaacaat tgcattcatt ttatgtttca ggttcagggg gagatgtggg aggttttttt
1921 aagcaagtaa aacctctaca aatgtggtaa aatcgaattt taacaaaata ttaacgctta
1981 caatttcctg atgcggtatt ttctccttac gcatctgtgc ggtatttcac accgcatacg
2041 cggatctgcg cagcaccatg gcctgaaata acctctgaaa gaggaacttg gttaggtacc
2101 ttctgaggcg gaaagaacca gctgtggaat gtgtgtcagt tagggtgtgg aaagtcccca
2161 ggctccccag caggcagaag tatgcaaagc atgcatctca attagtcagc aaccaggtgt
2221 ggaaagtccc caggctcccc agcaggcaga agtatgcaaa gcatgcatct caattagtca
2281 gcaaccatag tcccgcccct aactccgccc atcccgcccc taactccgcc cagttccgcc
2341 cattctccgc cccatggctg actaattttt tttatttatg cagaggccga ggccgcctcg
2401 gcctctgagc tattccagaa gtagtgagga ggcttttttg gaggcctagg cttttgcaaa
2461 aagctcgatt cttctgacac tagcgccacc atgaagaagc ccgaactcac cgctaccagc
2521 gttgaaaaat ttctcatcga gaagttcgac agtgtgagcg acctgatgca gttgtcggag
2581 ggcgaagaga gccgagcctt cagcttcgat gtcggcggac gcggctatgt actgcgggtg
2641 aatagctgcg ctgatggctt ctacaaagac cgctacgtgt accgccactt cgccagcgct
2701 gcactaccca tccccgaagt gttggacatc ggcgagttca gcgagagcct gacatactgc
2761 atcagtagac gcgcccaagg cgttactctc caagacctcc ccgaaacaga gctgcctgct
2821 gtgttacagc ctgtcgccga agctatggat gctattgccg ccgccgacct cagtcaaacc
2881 agcggcttcg gcccattcgg gccccaaggc atcggccagt acacaacctg gcgggatttc
2941 atttgcgcca ttgctgatcc ccatgtctac cactggcaga ccgtgatgga cgacaccgtg
3001 tccgccagcg tagctcaagc cctggacgaa ctgatgctgt gggccgaaga ctgtcccgag
3061 gtgcgccacc tcgtccatgc cgacttcggc agcaacaacg tcctgaccga caacggccgc
3121 atcaccgccg taatcgactg gtccgaagct atgttcgggg acagtcagta cgaggtggcc
3181 aacatcttct tctggcggcc ctggctggct tgcatggagc agcagactcg ctacttcgag
3241 cgccggcatc ccgagctggc cggcagccct cgtctgcgag cctacatgct gcgcatcggc
3301 ctggatcagc tctaccagag cctcgtggac ggcaacttcg acgatgctgc ctgggctcaa
3361 ggccgctgcg atgccatcgt ccgcagcggg gccggcaccg tcggtcgcac acaaatcgct
3421 cgccggagcg cagccgtatg gaccgacggc tgcgtcgagg tgctggccga cagcggcaac
3481 cgccggccca gtacacgacc gcgcgctaag gaggtaggtc gagtttagac tctagccatc
3541 acgatggccg caataaaata tctttatttt cattacatct gtgtgttggt tttttgtgtg
3601 aatcgatagc gataaggatc ctctttgcgc ttgcgttttc ccttgtccag atagcccagt
3661 agctgacatt catccggggt cagcaccgtt tctgcggact ggctttctac gtaatggttt
3721 cttagacgtc aggtggcact tttcggggaa atgtgcgcgg aacccctatt tgtttatttt
3781 tctaaataca ttcaaatatg tatccgctca tgagacaata accctgataa atgcttcaat
3841 aatattgaaa aaggaagagt atgagtattc aacatttccg tgtcgccctt attccctttt
3901 ttgcggcatt ttgccttcct gtttttgctc acccagaaac gctggtgaaa gtaaaagatg
3961 ctgaagatca gttgggtgca cgagtgggtt acatcgaact ggatctcaac agcggtaaga
4021 tccttgagag ttttcgcccc gaagaacgtt ttccaatgat gagcactttc aaagttctgc
4081 tatgtggcgc ggtattatcc cgtattgacg ccgggcaaga gcaactcggt cgccgcatac
4141 actattctca gaatgacttg gttgagtact caccagtcac agaaaagcat cttacggatg
4201 gcatgacagt aagagaatta tgcagtgctg ccataaccat gagtgataac actgcggcca
4261 acttacttct gacaactatc ggaggaccga aggagctaac cgcttttttg cacaacatgg
4321 gggatcatgt aactcgcctt gatcgttggg aaccggagct gaatgaagcc ataccaaacg
4381 acgagcgtga caccacgatg cctgtagcaa tggcaacaac gttgcgcaaa ctattaactg
4441 gcgaactact tactctagct tcccggcaac aattaataga ctggatggag gcggataaag
4501 ttgcaggacc acttctgcgc tcggcccttc cggctggctg gtttattgct gataaatctg
4561 gagccggtga gcgtgggtct cgcggtatca ttgcagcact ggggccagat ggtaagccct
4621 cccgtatcgt agttatctac acgacgggga gtcaggcaac tatggatgaa cgaaatagac
4681 agatcgctga gataggtgcc tcactgatta agcattggta attcgaaatg accgaccaag
4741 cgacgcccaa ccggtatcag ctcactcaaa ggcggtaata cggttatcca cagaatcagg
4801 ggataacgca ggaaagaaca tgtgagcaaa aggccagcaa aaggccagga accgtaaaaa
4861 ggccgcgttg ctggcgtttt tccataggct ccgcccccct gacgagcatc acaaaaatcg
4921 acgctcaagt cagaggtggc gaaacccgac aggactataa agataccagg cgtttccccc
4981 tggaagctcc ctcgtgcgct ctcctgttcc gaccctgccg cttaccggat acctgtccgc
5041 ctttctccct tcgggaagcg tggcgctttc tcatagctca cgctgtaggt atctcagttc
5101 ggtgtaggtc gttcgctcca agctgggctg tgtgcacgaa ccccccgttc agcccgaccg
5161 ctgcgcctta tccggtaact atcgtcttga gtccaacccg gtaagacacg acttatcgcc
5221 actggcagca gccactggta acaggattag cagagcgagg tatgtaggcg gtgctacaga
5281 gttcttgaag tggtggccta actacggcta cactagaagg acagtatttg gtatctgcgc
5341 tctgctgaag ccagttacct tcggaaaaag agttggtagc tcttgatccg gcaaacaaac
5401 caccgctggt agcggtggtt tttttgtttg caagcagcag attacgcgca gaaaaaaagg
5461 atttcaagaa gatcctttga tcttttctac ggggtctgac gctcagtgga acgaaaactc
5521 acgttaaggg attttggtca tgagattatc aaaaaggatc ttcacctaga tccttttata
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//
