| 载体名称: | pAdVAntage |
|---|---|
| 质粒类型: | 哺乳动物细胞载体 |
| 高拷贝/低拷贝: | 高拷贝 |
| 克隆方法: | 多克隆位点 |
| 启动子: | -- |
| 载体大小: | 4392 bp |
| 5' 测序引物及序列: | -- |
| 3' 测序引物及序列: | -- |
| 载体标签: | -- |
| 载体抗性: | 氨苄青霉素 |
| 筛选标记: | -- |
| 克隆菌株: | DH5a |
| 宿主细胞（系）: | 293T细胞等哺乳细胞 |
| 产品目录号: | E1711 |
| 稳定性: | 稳定 |
| 组成型/诱导型: | 诱导型 |
| 病毒/非病毒: | 非病毒 |
| 备注: | pAdvantage载体使用方案 |
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pAdVAntage载体质粒基本信息
pAdVAntage质粒图谱载体图谱和pAdVAntage载体序列质粒序列多克隆位点信息
pAdVAntage质粒载体简介
用pAdVAntageô载体共转染哺乳动物细胞，通过增加翻译起始效率，能够增强在多种细胞类型中的瞬时蛋白表达。
用表达载体转染哺乳动物细胞通常导致目的蛋白的亚最佳表达。在转染过程中产生的双链RNA(dsRNA)被认为可以激活“dsRNA激活抑制剂（DAI）”。DAI是宿主细胞内抗病毒防御系统的几种酶之一。
DAI磷酸化翻译起始因子eIF-2，导致蛋白翻译停止，从而停止蛋白质表达。
然而，DAI对蛋白翻译的抑制可以用腺病毒相关I RNA（VAI RNA），这个共转染pAdVAntage质粒后，由RNA聚合酶III产生在与共转染后。
VAI RNA结合 DAI，阻止其抑制活性，从而允许蛋白翻译和表达。
pAdVAntage质粒的碱基对9831-11555，是腺病毒2型基因组的1724bp SalI-HindIII的片段，编码病毒相关RNA基因VAI和VAII。
案例展示：使用pAdVAntageô载体在HeLa和293细胞中的增强目的蛋白表达
为了阐明pAdVAntageôVector增强蛋白表达的能力，我们对293和HeLa细胞进行了共转染实验，
用pGL2-Control质粒和pAdVAntage质粒或pBR322质粒作为实验对照。
将细胞转染在60mm组织培养皿中，使用ProFection转染试剂，转染5ug哺乳动物的pGL2-Control（目录号E1611）质粒。
与pGL2-Control共转染的pAdVAntag DNA或pBR322 DNA
如表1所示，比率范围为1:10至1:1。转染后48小时裂解细胞，使用荧光素酶测定系统（Cat#E1500）。
共转染导致荧光素酶活性的相对增加倍数
使用pAdVAntage的荧光素酶活性测定，以与pBR322共转染的细胞作为比较的基线。
在这些实验中，用pAdVAntage共转染293细胞，显示荧光素酶表达增加了10-70倍。
而HeLa细胞，用pAdVAntage和pGL2-Control共转染，显示出4至40倍的荧光素酶的表达提升。
pAdVAntage质粒序列载体序列
LOCUS pAdVantage 4392 bp DNA circular SYN 09-NOV-2022
DEFINITION synthetic circular DNA
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS .
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 4392)
AUTHORS Ming
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported Nov 9, 2022 from SnapGene 6.0.2
https://www.snapgene.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..4392
/mol_type="other DNA"
/organism="synthetic DNA construct"
primer_bind complement(1743..1759)
/label=M13 rev
/note="common sequencing primer, one of multiple similar
variants"
protein_bind 1767..1783
/label=lac operator
/bound_moiety="lac repressor encoded by lacI"
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
promoter complement(1791..1821)
/label=lac promoter
/note="promoter for the E. coli lac operon"
protein_bind 1836..1857
/label=CAP binding site
/bound_moiety="E. coli catabolite activator protein"
/note="CAP binding activates transcription in the presence
of cAMP."
rep_origin complement(2145..2733)
/direction=LEFT
/label=ori
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(2904..3764)
/codon_start=1
/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
/label=AmpR
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
promoter complement(3765..3869)
/gene="bla"
/label=AmpR promoter
primer_bind 4343..4359
/label=M13 fwd
/note="common sequencing primer, one of multiple similar
variants"
ORIGIN
1 gtcgacagaa gcaccatgtc cttgggtccg gcctgctgaa tgcgcaggcg gtcggccatg
61 ccccaggctt cgttttgaca tcggcgcagg tctttgtagt agtcttgcat gagcctttct
121 accggcactt cttcttctcc ttcctcttgt cctgcatctc ttgcatctat cgctacggcg
181 gcggcggagt ttggccgtag gtggcgccct cttcctccca tgcgtgtgac cccgaagccc
241 ctcatcggct gaagcagggc caggtcggcg acaacgcgct cggctaatat ggcctgctgc
301 acctgcgtga gggtagactg gaagtcatcc atgtccacaa agcggtggta tgcgcccgtg
361 ttgatggtgt aagtgcagtt ggccataacg gaccagttaa cggtctggtg acccggctgc
421 gagagctcgg tgtacctgag acgcgagtaa gcccttgagt caaagacgta gtcgttgcaa
481 gtccgcacca ggtactgata tcccaccaaa aagtgcggcg gcggctggcg gtagaggggc
541 cagcgtaggg tggccggggc tccgggggcg aggtcttcca acataaggcg atgatatccg
601 tagatgtacc tggacatcca ggtgatgccg gcggcggtgg tggaggcgcg cggaaagtcg
661 cggacgcggt tccagatgtt gcgcagcggc aaaaagtgct ccatggtcgg gacgctctgg
721 ccggtgaggc gtgcgcagtc gttgacgctc tagaccgtgc aaaaggagag cctgtaagcg
781 ggcactcttc cgtggtctgg tggataaatt cgcaagggta tcatggcgga cgaccggggt
841 tcgaaccccg gatccggccg tccgccgtga tccatgcggt taccgcccgc gtgtcgaacc
901 caggtgtgcg acgtcagaca acgggggagc gctccttttg gcttccttcc aggcgcggcg
961 gctgctgcgc tagctttttt ggccactggc cgcgcgcggc gtaagcggtt aggctggaaa
1021 gcgaaagcat taagtggctc gctccctgta gccggagggt tattttccaa gggttgagtc
1081 gcaggacccc cggttcgagt ctcgggccgg ccggactgcg gcgaacgggg gtttgcctcc
1141 ccgtcatgca agaccccgct tgcaaattcc tccggaaaca gggacgagcc ccttttttgc
1201 ttttcccaga tgcatccggt gctgcggcag atgcgccccc ctcctcagca gcggcaagag
1261 caagagcagc ggcagacatg cagggcaccc tccccttctc ctaccgcgtc aggaggggca
1321 acatccgcgg ctgacgcggc ggcagatggt gattacgaac ccccgcggcg ccgggcccgg
1381 cactacctgg acttggagga gggcgagggc ctggcgcggc taggagcgcc ctctcctgag
1441 cgacacccaa gggtgcagct gaagcgtgac acgcgcgagg cgtacgtgcc gcggcagaac
1501 ctgtttcgcg accgcgaggg agaggagccc gaggagatgc gggatcgaaa gttccacgca
1561 gggcgcgagt tgcggcatgg cctgaaccgc gagcggttgc tgcgcgagga ggactttgag
1621 cccgacgcgc ggaccgggat tagtcccgcg cgcgcacacg tggcggccgc cgacctggta
1681 accgcgtacg agcagacggt gaaccaggag attaactttc aaaaaagctt ggcgtaatca
1741 tggtcatagc tgtttcctgt gtgaaattgt tatccgctca caattccaca caacatacga
1801 gccggaagca taaagtgtaa agcctggggt gcctaatgag tgagctaact cacattaatt
1861 gcgttgcgct cactgcccgc tttccagtcg ggaaacctgt cgtgccagct gcattaatga
1921 atcggccaac gcgcggggag aggcggtttg cgtattgggc gctcttccgc ttcctcgctc
1981 actgactcgc tgcgctcggt cgttcggctg cggcgagcgg tatcagctca ctcaaaggcg
2041 gtaatacggt tatccacaga atcaggggat aacgcaggaa agaacatgtg agcaaaaggc
2101 cagcaaaagg ccaggaaccg taaaaaggcc gcgttgctgg cgtttttcca taggctccgc
2161 ccccctgacg agcatcacaa aaatcgacgc tcaagtcaga ggtggcgaaa cccgacagga
2221 ctataaagat accaggcgtt tccccctgga agctccctcg tgcgctctcc tgttccgacc
2281 ctgccgctta ccggatacct gtccgccttt ctcccttcgg gaagcgtggc gctttctcat
2341 agctcacgct gtaggtatct cagttcggtg taggtcgttc gctccaagct gggctgtgtg
2401 cacgaacccc ccgttcagcc cgaccgctgc gccttatccg gtaactatcg tcttgagtcc
2461 aacccggtaa gacacgactt atcgccactg gcagcagcca ctggtaacag gattagcaga
2521 gcgaggtatg taggcggtgc tacagagttc ttgaagtggt ggcctaacta cggctacact
2581 agaagaacag tatttggtat ctgcgctctg ctgaagccag ttaccttcgg aaaaagagtt
2641 ggtagctctt gatccggcaa acaaaccacc gctggtagcg gtggtttttt tgtttgcaag
2701 cagcagatta cgcgcagaaa aaaaggatct caagaagatc ctttgatctt ttctacgggg
2761 tctgacgctc agtggaacga aaactcacgt taagggattt tggtcatgag attatcaaaa
2821 aggatcttca cctagatcct tttaaattaa aaatgaagtt ttaaatcaat ctaaagtata
2881 tatgagtaaa cttggtctga cagttaccaa tgcttaatca gtgaggcacc tatctcagcg
2941 atctgtctat ttcgttcatc catagttgcc tgactccccg tcgtgtagat aactacgata
3001 cgggagggct taccatctgg ccccagtgct gcaatgatac cgcgagaccc acgctcaccg
3061 gctccagatt tatcagcaat aaaccagcca gccggaaggg ccgagcgcag aagtggtcct
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3901 taagaaacca ttattatcat gacattaacc tataaaaata ggcgtatcac gaggcccttt
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4081 ggtgttggcg ggtgtcgggg ctggcttaac tatgcggcat cagagcagat tgtactgaga
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4321 gggttttccc agtcacgacg ttgtaaaacg acggccagtg aattcgagct cggtacccgg
4381 ggatcctcta ga
//
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pAdVAntage质粒载体应用举例
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