毕赤酵母MGAs培养基

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规格: 1L 5L

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MGAs medium产品基本信息

产品名称: MGAs培养基;含有硫酸铵的基础甘油培养基
英文名称: Minimal Glycerol with Ammonium sulfate;MGAs medium
培养基类型: 基础培养基
级别: AR级
品牌: ELITE-MEDIA(艾礼培养基)
产品目录号: M376-01、M376-02、M376-03、M376-04
产品规格: 1L(无菌液体,500mL/瓶)、5L(无菌液体,1L/瓶)、20g(粉末)、100g( 粉末)
产品外观: 浅黄色至乳白色均一粉末。
颜色与澄清度: 接近无色的透明溶液。
保存条件: 密封,2-8°C避光保存。
注意事项: 避免摄入、吸入、皮肤接触。
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艾礼培养基


产品描述:

MGAs培养基(Minimal Glycerol with Ammonium sulfate) 即含有硫酸铵的基础甘油培养基,是一种基础培养基,与MMAs培养基MGMa培养基MMMa培养基一起使用,用于甲胺或(和)甲醇诱导的毕赤酵母重组蛋白表达。
MGAs培养基主要用于表达前的扩增培养,而MMAsMGMaMMMa培养基则是诱导表达时所用的培养基。
这些培养基适用于以Zeocin为筛选标记、甲胺诱导的毕赤酵母表达系统:pFLD载体pFLDα载体X-33酵母、KM71H酵母、SMD1168H酵母。



配方与配制方法:

YNB(不含硫酸铵) 1.7 g
硫酸铵 5.0 g
生物素 0.4 mg
甘油 10 g

配制方法:
用100mL蒸馏水溶解6.7g MGAs培养基基础,用0.2µm滤膜过滤除菌。
向800ml蒸馏水中加入100ml10%甘油水溶液(含10g甘油),然后121℃高压蒸汽灭菌20min。
冷却至50℃左右时,混合上述两种溶液。



甲胺诱导的毕赤酵母蛋白表达实验方法:

诱导表达

可以使用甲醇、甲胺或者甲醇加甲胺诱导FLD1 基因的表达。以下以野生型X-33菌株为例的诱导流程如下。
1. 对于任一形式的诱导方法,均用MGAs培养基,30℃,250–300 rpm,摇床培养至OD600 达到4。
2.室温,1500–3000×g ,离心5min,收集细胞。
然后:
• 对于以甲醇为诱导剂的,弃掉上清液,用1/5原始体积的MMAs培养基重悬菌体沉淀。
• 对于以甲胺为诱导剂的,弃掉上清液,用1/5原始体积的MGMa培养基重悬菌体沉淀。
• 对于以甲胺和甲醇为诱导剂的,弃掉上清液,用1/5原始体积的MMMa培养基重悬菌体沉淀。

3. 30℃培养5天。对于含有甲醇或者甲醇和甲胺的培养基,每隔24h加入终浓度0.5%的100%甲醇以保持诱导。

时间点:
0, 24 h, 48 h, 72 h, 96 h, 120 h
在下面给出的时间点,转移1mL菌液到1.5mLEP管中,用桌面离心机的最高转速,室温条件下,离心2-3min。这些样品将用于分析表达水平,以确定诱导后的最佳收获时间。




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