M9 SeMET High-Yield Growth Medium

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规格: 2L 5L

联系方式:I47-825O-882O

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M9-SeMET高表达培养基产品基本信息

产品名称: M9-SeMET高表达培养基;M9硒代甲硫氨酸标记蛋白高表达培养基
英文名称: M9 SeMET High-Yield Growth Medium
培养基类型: 合成培养基
级别: for microbiology
品牌: ELITE-MEDIA(艾礼培养基)
产品目录号: M180-01、M180-02、M180-03
产品规格: 2L、5L、20L
产品外观: 无色至淡黄色透明溶液。
灭菌后颜色与澄清度: 无色至淡黄色透明溶液。
保存条件: 密封,2-25°C保存。制备好的培养基2-8°C避光保存。
注意事项: 避免摄入、吸入、皮肤接触。
相关产品: --
艾礼培养基


产品描述:

M9-SeMET高表达培养基(M9 SeMET High-Yield Medium)是一种合成培养基,用于大肠杆菌达硒代甲硫氨酸标记的蛋白质(Seleno-Methionine labeled protein),以制备蛋白晶体。
本配方适合非氨基酸缺陷型大肠杆菌,对于营养缺陷型大肠杆菌菌株,需要添加对应成分到培养基中。



配方与配制方法

组分 g/L
葡萄糖 4
MgSO4 0.24
CaCl2 0.011
Na2HPO4-7H2O 12.8
KH2PO4 3
NaCl 0.5
NH4Cl 1.0
维生素B1 0.001
维生素B7 0.001
维生素B2 0.001
维生素B3 0.001
维生素B6 0.001
EDTA 0.05
FeCl3 x 6 H2O 0.0083
ZnCl2 0.00084
CuCl2 x 2 H2O 0.00013
CoCl2 x 6 H2O 0.0001
H3BO3 0.0001
MnCl2 x 6 H2O 0.016
Na2MoO4•H2O 0.0003
赖氨酸 0.1
苯丙氨酸 0.1
苏氨酸 0.1
异亮氨酸 0.05
亮氨酸 0.05
缬氨酸 0.05
SeMet(硒代甲硫氨酸) 0.06

M9基础培养基

组分 g/L
5x M9 salts 200 ml
20%葡萄糖 20 ml
1M MgSO4 2 ml
1M CaCl2 0.1 ml
1000x微量元素 1 ml
1000x维生素 1 ml

M9氨基酸

赖氨酸 0.1
苯丙氨酸 0.1
苏氨酸 0.1
异亮氨酸 0.05
亮氨酸 0.05
缬氨酸 0.05
SeMet(硒代甲硫氨酸) 0.06


实验方法:

SeMet是有毒的。培养基上清液应该集中起来当做有害物质处理。废液瓶中液面到肩处,不要到瓶口处。标记好有害物标签。参考实验室标准操作流程,正确使用SeMet。最低安全措施,操作人员需要合适的个人防护装置,包括丁腈橡胶手套、实验服、全覆盖的鞋。

接种:
早晨,将甘油菌或单克隆接种到2-5ml LB培养基中,培养至下午4、5点钟。
离心菌液,丢弃上清液,收集菌体细胞。
将菌体接种到50ml或100ml M9基础培养基中,37ºC过夜培养。提前一天将M9基础培养基过夜预热和预通气,能够极大的加快起始生长速度。

接种过夜培养物
取20ml过夜培养的菌液接种到1L M9基础培养基中,37ºC培养。
直到DO600值达到0.5~0.6。一般来说需要大约10h。
加入氨基酸混合物,以抑制甲硫氨酸合成,提供硒代甲硫氨酸合成用底物。再继续培养15min。

诱导、表达、收集
接下来的流程与普通蛋白表达流程相同。例如以25ºC作为表达温度。
在加入混合氨基酸15min后,将温度降至25ºC。
10min后加入IPTG ,工作浓度为1 mM/L。
过夜表达(一般为16-18h)。


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M9-SeMET高表达培养基产品应用举例

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