KM71H

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毕赤酵母菌株基本信息

出品公司: Invitrogen
感受态细胞名称: KM71H酵母, KM71H毕赤酵母
菌株类型: 毕赤酵母
产品目录号: C182-00
培养基: YPD培养基
生长条件: 28-30 ℃,  有氧
基因型: aox1::ARG4, arg4
表型: MutS, Arg+
抗性: 氨苄和卡那
质粒转化条件: 电转
应用: 蛋白表达
诱导方法: 甲醇
菌株特点:
KM71H是毕赤酵母菌株,属于真核细胞。一般的针对原核生物的抗生素例如卡那和氨苄对酵母是无效的,因此为了防止大肠杆菌等原核生物对酵母培养菌株污染,往往会在培养基中加入一些氨苄和卡那霉素的抗生素,来抑制细菌菌的污染和生长。

毕赤酵母适宜的生长温度是28至30度,温度超过32度对蛋白的表达是有害的,并可能导致细胞的死亡。

KM71H毕赤酵母可以在YPD培养基中生长。

KM71H毕赤酵母被推荐用来表达含有Zeocin抗性的载体载体重组质粒,例如pPICZ A,B,C系列的载体。

在筛选KM71H重组转化菌株时,Zeocin抗生素的工作浓度是100 ug/ml。

KM71H宿主菌中的AOX1基因含有一个片段缺失,当pPICZ A,B,C或者pPICZα A,B,C转化到KM71H中时只能产生出MutS转化株,不必在进行Mut基因型的筛选了。

KM71H的来源母细胞在精氨琥珀酸裂解酶基因(arg4)含有一个突变,这使得菌株无法在不含有精氨酸的培养基中生长。而KM71H酵母细胞中在AOX1基因处插入了一个正常的arg4基因,从而形成了KM71H的MutS, Arg+   表型。

将约2kb 的Arg4基因克隆出来后插入到KM71H来源菌株内的野生型的AOX1基因的BamH I(16 bp)和Sal I(227 bp)中间,从而构建成功KM71H。ARG4基因直接替换了AOX1基因 的16-227片段序列。

KM71H毕赤酵母细胞的优点是不需要利用甲醇minimal media筛选菌株的Mut基因型,因为所有的转化株都是MutS菌株。另外,AOX1基因并没有被完全删除,理论上你可以用自己的基因替换其中的Arg4基因,从而生成MutS, Arg-的转化株,但是由于实验表明该基因型酵母菌株在含有精氨酸的minimal media上并不能很好的生长,所以并不鼓励大家进行这种基因替换尝试。

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毕赤酵母菌株应用举例

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