PEI转染试剂Polysciences MW25000 MW40000

价格:

规格: MaxFect Transfection Regent(1ml) PEI MW25000(1g)

联系方式:I47-825O-882O

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线性聚乙烯亚胺Polyethylenimine产品基本信息

产品名称: PEI转染试剂、Polyethylenimine、线性聚乙烯亚胺、线性PEI、转染级别PEI
英文名称:
Polyethylenimine, Linear, MW 25000, Transfection Grade (PEI 25K™)
(Polysciences#23966-1 1g; Polysciences#23966-100  100mg)
PEI MAX - Transfection Grade Linear Polyethylenimine Hydrochloride (MW 40,000)
 (Polysciences#24765-1 1g; Polysciences#24765-100  100mg)
 
规格: 1 g,  1 ml
产品目录号:
Polyethylenimine, Linear, MW 25000, Transfection Grade (PEI 25K™)                       1g          Polyscience#23966-1
PEI MAX - Transfection Grade Linear Polyethylenimine Hydrochloride (MW 40,000)   1g          Polyscience#24765-1
MaxFect  Transfection Regent   1ml       Biofeng# A609
 
贮存条件: 避光,-20度
CAS号:
Polyethylenimine, Linear, MW 25000, Transfection Grade (PEI 25K™)   CAS Number: 9002-98-6, 26913-06-4 
PEI MAX - Transfection Grade Linear Polyethylenimine Hydrochloride (MW 40,000)   CAS Number: 49553-93-7
MaxFect Transfection Regent       CAS Number: 49553-93-7       
 
物理性状: 固体为白色或近白色粉末。 1 mg/mL水溶液透明,接近无色或略显黄色。

用途:

细胞培养级别的质粒转染。本产品仅供科研使用,不能用于临床治疗。
PEI MW25000和PEI Max MW40000区别:

PEI MAX MW40000 ( Polysciences#24765-1)是线性化聚乙烯亚胺PEI MW25000(Polysciences#23966-1)的升级产品,是一种功能更为强大的高效瞬时转染试剂。PEI MAX MW40000与PEI 25000的区别在于:
1)完全水解(去乙酰化)
2)PEI 25000的盐酸盐形式,具更高的水溶特性
3)含更长连续性乙烯亚胺片段,其转染效率比PEI MW25000提高11%以上。
4)PEI MAX 40K比PEI 25K更易于使用,并且更高效。PEI 25K转染溶液通常需要几个小时才能制备,而PEI MAX 40K可以在两个小时内转化为即用型可溶性溶液。
5)PEI 25K含有4-11%的残余丙酰基,可防止聚合物主链与DNA强烈结合。PEI MAX 40K完全去乙酰化的结构意味着每批产品的表现始终如一,稳定性更强。

储存浓度:

1 mg/ml

工作浓度:

3 ug/ml 左右,每ml培养基加入3 ul储存液。
PEI转染试剂配置方法:
1. 称取100mg PEI转染试剂,溶解于100ml无菌水中。配置的终浓度是1 mg/ml.
2. 缓慢使用稀盐酸,调节PH至7.0,一定不要让pH过了,一旦过了效果就不好了。
3. 使用0.1um或者0.22um无菌过滤器,过滤除菌。
4. 分装成每管500ul-1ml,-20度,保存,备用。
5. 使用超纯水配置,器具一定要灭菌干净,防止支原体污染。
 
适用范围:

本产品适用于绝大多数真核细胞质粒转染:HEK 293,293T,A549,B16F10,HeLa,Hepa 1-6,Hepa-1c1c7,HepG2,BHK-21,C2C12,C6,CHO-K1,COS-1,COS-7,Daoy,DU 145,K562,KB,LL/2(LLC1), LNCaP-FGC,MCF-7,MEL,Neuro-2a,NIH3T3,OVCAR-3,PC-3,PC-12等。
细胞培养基:
PEI转染试剂适用于大多数常用细胞培养基,且转染前后不需要更换培养基,血清的存在不影响转染效率。
 
转染时细胞密度:
一般来说,当细胞密度达到60% - 80%时进行转染可以取得较高的转染效率。然而,不同细胞的最适转染密度都不尽相同。因此在初次转染某种细胞时,可以通过预实验先确认该细胞最佳的转染密度。
转染质粒纯度和浓度:

用于细胞转染的DNA应具有较高的纯度,且无内毒素残留(推荐使用无内毒素质粒大提试剂盒进行质粒抽提)。质粒浓度尽量高一些,建议大于500 ng/ul.
转染比例:
DNA:PEI = 1:3
1ml细胞培养液,建议使用1 ug-3 ug DNA 和3 ul - 9 ul PEI转染试剂储存液。具体根据细胞情况自由调整。
在初次转染某种细胞时,推荐PEI和DNA的比例为2:1,即1 μg DNA使用2 μl PEI。转染1 μg DNA所使用的PEI转染试剂剂量可以在1 - 5 μl之间进行调整以获得最佳的转染效率。
 
转染后细胞培养时间:
对于绝大多数细胞实验而言培养24 - 48 h即可,如实验情况特殊可在12 - 72 h之间进行优化。
细胞转染步骤:
以6孔板细胞培养转染为例:

使用细胞培养液3ml,DNA质粒3ug,PEI转染试剂9ug。可以根据不同细胞特性,增加DNA和PEI使用量。

细胞培养
1. 转染前24 h左右对细胞进行传代,接种密度约为1 - 3 × 105 cells/well。细胞接种密度,大约在60%左右。
2. 过夜培养。
3. 吸出培养液,使用新鲜培养液清洗3-4次。然后,加入2.7 ml新鲜配置的完全培养基。因为细胞过夜生长的分泌物有可能影响转染效率,所有建议进行细胞清洗操作。更换新鲜培养液,有助于转染后的细胞表达和生长,防止细胞营养的不足。
     也可以不吸出培养液,不更换新鲜培养液,直接进行细胞转染。
4. 当细胞汇合度达到60% - 80%时,转染可以取得较高的转染效率。

PEI/DNA复合物配置
1. 在1.5 ml无菌离心管中加入150 μl opti-MEM无血清培养基,并加入3 ug DNA质粒,用移液器轻轻混匀。
2. 在1.5 ml无菌离心管中加入150 μl opti-MEM无血清培养基,并加入9 ug PEI转染试剂储存液,用移液器轻轻混匀。
3. 将PEI-opti-MEM滴加至DNA-opti-MEM中,用移液器轻轻混匀,室温静置15 - 30 min后可用于转染。注意:形成的PEI/DNA复合物溶液尽量在30 min内使用。
4. PEI/DNA复合物的形成,一定是分别在无血清培养基中稀释后,再进行混匀。血清的存在会干扰复合物的形成。

细胞转染
1. 将PEI/DNA复合物混合液滴加至6孔板培养基中,轻轻晃动吹打培养液使PEI/DNA复合物均匀分散。
2. 过夜培养24-72小时。
初始转染条件: PEI质粒转染体系
PEI转染效率:
细胞种类                 中文名称                         PEI 转染效率
HEK293                 人胚肾细胞                       90%-95%
293-T                     人胚肾细胞                       90%-95%
CHO-K1                 仓鼠卵巢细胞                   80%-90%
U251                     人源神经胶质瘤细胞         80%-90%
Hela                      人源宫颈癌细胞                70%-80%
COS7                    猴 SV40 转化肾细胞         70%-80%
HepG2                  人源肝癌细胞                    70%-80%
NIH/3T3                小鼠胚胎成纤维细胞          60%-70%
胶质瘤干细胞       人源胶质瘤干细胞              60%-70%
Patu8988             人源胰腺癌细胞                  60%-70%
U2OS                   人源骨肉瘤细胞                  60%-70%
产品图片:
Polyethylenimine, Linear, MW 25000, Transfection Grade (PEI 25K™) 
(Polyscience#23966-1 1g)

PEI MAX - Transfection Grade Linear Polyethylenimine Hydrochloride (MW 40,000) 
 (Polyscience#24765-1 1g)

PEI转染试剂MW25000产品图片   PEI转染试剂MW40000产品图片

参考文献和操作文档:

PEI MW25000转染试剂使用方法
PEI MAX转染贴壁和悬浮细胞方法
PEI MW25000(Polyscience#23966)转染试剂配置方法
PEI MW25000转染试剂配置方法2
PEI MAX MW4000转染试剂配置和使用方法
PEI质粒转染细胞方案
PEI质粒转染293T细胞实验方案
PEI转染悬浮细胞293F操作方法
PEI MAX转染质粒Expi293悬浮细胞实验方案
PEI 转染质粒AAV腺病毒扩增案例
PEI转染质粒慢病毒扩增案例
PEI转染质粒扩增第三代慢病毒方案
PEI转染质粒扩增逆病毒方案
PEI转染质粒扩增狂犬病EIAV病毒实验方案

PEI转染试剂质粒转染效果图


PEI转染试剂效果图


PEI转染试剂效果图

PEI转染试剂效果图


PEI转染细胞常见问题与解决方案


. 转染效率偏低

1. PEI与DNA的比例不合适
通过预实验优化ExFect与DNA的最佳比例:在ExFect 1 - 5 μl/μg DNA范围内尝试,优化DNA的使用量:以24孔板为例,在0.5 - 2 μg/孔范围内优化(具体可参见表一)。在后续的实验中选择转染效率高、细胞毒性低的比例进行转染。

2.PEI原液或/和DNA原液未经无血清培养基稀释直接混合
PEI和DNA需分别在无血清培养基条件下按一定比例稀释后再进行混合孵育。
 
3. 转染时细胞密度不合适
多数情况下,当细胞汇合度达到60% - 80%时,转染可以取得较高的转染效率。然而细胞类型不同,最适的转染密度也不尽相同。可以通过预实验优化细胞转染密度。
 
4.DNA质量偏低(降解或内毒素)
为实现高效率、低毒性的转染,应使用高纯度、无菌、无内毒素的质粒DNA。
 
5.PEI/DNA复合物形成的反应体系中包含血清
当ExFect/DNA复合物形成反应体系中存在血清时,ExFect/DNA复合物无法正常形成。
 
6.转染体系中存在转染抑制因素
当转染体系中存在多聚阴离子聚合物时(例如:硫酸葡聚糖、肝素等),转染将无法正常进行。因此应避免上述物质存在于细胞转染体系中。
 
7.细胞状态偏差
传代次数太少或者太多都将导致细胞转染效率的改变。因此,为了提高转染效率以及转染稳定性,应尽量使用适度传代的细胞系,并尽量在平行实验时保持细胞传代次数的一致性。另外,支原体的感染或爆发会影响细胞的转染效率。建议使用支原体检测和/或清除试剂盒处理。


 
转染后细胞状态差

1.转染后细胞培养时间过长
多数情况下,在完全培养基中进行转染,24 h内无需换液处理,但是培养时间过长可能会导致细胞状态较差,建议根据实验需要合理安排后续实验时间。
 
2.转染时细胞密度不合适
多数情况下,当细胞汇合度达到60% - 80%时转染可以取得较高的转染效率。细胞密度过低导致细胞生长缓慢,对外来刺激变得较为敏感,使得转染毒性增高。细胞密度过高,会导致细胞发生接触抑制,加快细胞凋亡。
 
3.PEI/DNA过量
转染试剂过量会导致较高的细胞毒性。尝试降低转染试剂的使用比例或者减少DNA用量,具体比例参见表一。
 
4.PEI/DNA复合物加入培养基时分布不均匀
局部ExFect/DNA复合物浓度过高是导致细胞毒性偏高的最常见的原因之一。当PEI/DNA添加到细胞培养孔/皿之后,应即刻轻轻摇动培养板/皿,使之完全混匀。
 
5.细胞状态偏差
传代次数太少细胞状态未恢复,或者传代次数太多细胞老化,都将由于细胞生长状态不适而导致转染试剂毒性增加。因此应尽量使用适度传代的细胞,降低细胞代次差异对实验结果造成的影响。

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线性聚乙烯亚胺Polyethylenimine产品应用举例

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