3%氯化钠三糖铁琼脂

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TSI培养基产品基本信息

培养基名称: TSI培养基(3%氯化钠),3%氯化钠三糖铁琼脂
英文名称:
Triple Sugar Iron Agar(3%Nacl)
 
培养基类型: 鉴别培养基
产品目录号:
M720-02
 
产品规格: 250g      查看其它规格
保存条件:
避光,密封,阴凉干燥处保存。
 
产品性状: 浅粉色粉末。
红色透明至略半透明凝胶。
注意事项:
避免摄入、呼入、皮肤接触。配制时在通风橱中进行,戴口罩、手套、护目镜。
 
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Triple Sugar Iron Agar



产品描述:


3%氯化钠三糖铁琼脂培养基是嗜盐弧菌鉴别性固体培养基。本培养基配方采用《细菌学鉴定手册》给出的配方。3%氯化钠三糖铁琼脂是在TSI培养基的基础上增加了盐的浓度,更有利于嗜盐弧菌的生长。



TSI培养基(3%氯化钠)的工作原理:



细菌的鉴别归根结底是根据该种细菌能够水解、利用那些化合物。TSI培养基的鉴别依据是肠杆菌发酵3种糖类(即葡萄糖、乳糖、蔗糖)的能力和H2S生成能力,或者 说是四种代谢反应:葡萄糖发酵、乳糖和(或)蔗糖发酵、硫化物(这里指硫化铁)生成、氨基酸氧化脱氨作用。

三糖铁琼脂培养基采用的是斜面培养法,即三糖铁琼脂斜面,提供两种氧气环境:有氧的培养基表面(斜面,slant)和缺少氧气的培养基深处(试管底部,butt)。葡萄糖发酵产酸量很少,只能影响局部的pH值。培养基中的葡萄糖含量很少,葡萄糖被耗尽后,不能发酵乳糖糖和蔗糖的肠杆菌继而以 蛋白胨为碳源。氨基酸氧化脱氨产生NH3,使培养基斜面处呈碱性。能够发酵乳糖和(或)蔗糖的肠杆菌在无氧条件下能够产大量的酸 ,使整个培养基呈酸性。有的菌种发酵糖类时还产气(主要为二氧化碳),表现为琼脂培养基出现断裂或有气泡。硫化氢在碱性条件下 与铁离子生成黑色沉淀——Fe2S3 ,使培养基变黑。但酸性条件下,Fe2S3不稳定,硫化氢则以气体形式被释放。因此对于快速产酸的 微生物,H2S生成可能被掩蔽。

酚红是酸碱指示剂,变色范围:pH6.6(黄色)~pH8.4(红色) 。中性条件下显红色,当pH>8.4,变成紫红色。

蔗糖有助于大肠菌的快速检测,鉴于其发酵蔗糖的速度高于发酵乳糖的速度。另外,某些革兰氏阴性菌不能够发酵乳糖,只能发酵蔗糖。

硫代硫酸根离子为H2S生成反应提供底物。

铁盐(硫酸亚铁或柠檬酸铁铵)是H2S指示剂,与H2S反应生产黑色沉淀。培养基变黑证明有H2S生成。值得注意的是,对于TSI培养基来说,这一结论的反向推论是不成立的,即培养基没有变黑并不能证明没有H2S生成。原因见上文。

牛肉提取物酵母提取物为细菌生长提供微量元素和生长因子。高浓度氯化钠对一般肠道菌有抑制作用,但适于嗜盐弧菌的生长。

蛋白胨作为主要氮源,也是非发酵型微生物的碳源。对于不能利用乳糖和蔗糖的微生物,当直接碳源葡萄糖耗尽后蛋白胨也作为碳源。




3%氯化钠三糖铁琼脂培养基配方与配制方法



培养基成分: 含量:g/L
混合蛋白胨 20.0
牛肉提取物 3.0
酵母提取物 3.0
葡萄糖 1.0
乳糖 10.0
蔗糖 10.0
氯化钠 30.0
柠檬酸铁铵 0.3
硫代硫酸钠 0.3
酚红 0.024
琼脂 12.0
pH
7.4± 0.2

配制方法:

1. 称取脱水培养基89.5g,用1L去离子水重悬,浸泡10min。

2. 摇晃混匀,不断搅拌,煮沸1min使其完全溶解。分装到16X150mm试管中,液面高度为三分之一试管高度。使用棉塞或可透气的试管盖。

3. 121°C高温蒸汽灭菌15min。不要过度加热。

4. 在冷却过程中倾斜放置试管,制备4-5cm长斜面,管底高度2-3cm。



实验方法


接种方法与注意事项:

三糖铁琼脂培养基 接种示意图



1. 将三糖铁琼脂制备成较短的斜面,使试管底部至斜面的距离增大,试管口用松散透气的棉塞塞住,不能堵死管口。以上处理的目的是获得缺氧与有氧两种培养环境。

2. 从选择性培养基上的单菌落中心处挑菌(越靠菌落中心的细胞越年轻),先用接种针穿刺接种到试管底部(必须接种到最底部,否则结果无效),抽出接种针,在斜面上划线接种。

3. 将接种后的试管置于培养箱中,35-37ºC,有氧,培养18-24h。观察结果。


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