自动诱导TB培养基

价格:

规格: 250g 500g

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Autoinductive Terrific Broth产品基本信息

产品名称: 自动诱导TB培养基;自动诱导超级肉汤
英文名称: Autoinductive Terrific Broth;Terrific Broth - Auto Induction Medium
培养基类型: 加富培养基
级别: for microbiology
品牌: ELITE-MEDIA(艾礼培养基)
产品目录号: M864-01、M864-02
产品规格: 250g、500g
产品外观: 米色均一粉末。
灭菌后颜色与澄清度: 琥珀色透明溶液。
保存条件: 密封,2-25°C保存。
注意事项: 避免摄入、吸入、皮肤接触。
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艾礼培养基


产品描述:

自动诱导超级肉汤(Autoinductive Terrific Broth)也称自动诱导TB培养基,用于Lac启动子驱动的大肠杆菌重组蛋白表达,无需添加IPTG。自诱导TB培养基能够获得高细胞密度,蛋白表达率高出IPTG诱导过程好几倍。


工作原理

Terrific Broth 由LB培养基改进而来,目的是获得高密度细胞。E. coli在该培养基中生长速度快于其在LB培养基或 2x YT肉汤中的生长速度。使用TB培养基还可以获得高产量质粒DNA和重组蛋白。

通常,外源蛋白在细菌中表达时常使用IPTG诱导的启动子,如Lac启动子。当细胞密度达到理想值时,通过向培养基中加入IPTG的方法诱导蛋白表达。使用这个自动诱导培养基,不再需要监测细胞密度和添加IPTG。葡萄糖作为半乳糖操纵子的阻遏因子阻止细菌利用α-乳糖,而被优先代谢,促进高密度生长。一旦培养基中的葡萄糖被耗尽(通常发生在对数期的后期),乳糖被ß-半乳糖苷酶转换成异乳糖(葡萄糖-1,6-半乳糖),而后者作为IPTG诱导型启动子的诱导剂,引起乳糖阻遏子从与DNA结合的位点上释放,启动重组蛋白的表达。对于DE3基因型的E.coli中,异乳糖使T7lac启动子去阻遏,并诱导lacUV5启动子表达T7 RNA聚合酶。通过这种方式,在细菌培养物生长到某一特定点时蛋白表达自发开始,去掉了监测细胞密度(OD600)和添加IPTG这两个步骤。与传统IPTG诱导的蛋白表达过程相比,使用自动诱导培养基极大地方便和简化了试验流程。另外还便于多克隆分析,如蓝白斑筛选。

该培养基中含有理想比例的葡萄糖和α-乳糖作为碳源和能量来源。胰蛋白胨提供氮源、维生素、矿物质和氨基酸,这些营养成分是细胞生长所必需的。酵母提取物是丰富的B族维生素来源。Studier salts为细菌细胞的生长提供最佳的生理环境。



配方与配制方法

Tryptone 12.0 g
Yeast Extract 24.0 g
α-乳糖 2.0 g
葡萄糖 0.5 g
Studier盐 17.05 g
Final pH 7.0 ± 0.2

1. 称取55.55g 脱水培养基粉末,用1L去离子水加热溶解。
2. 煮沸1min。
3. 115°C 灭菌20min。

不要过度加热,避免乳糖分解和培养基颜色加深。冷却后保存在2-8ºC,如果不染菌,可以保存2个月左右。


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