硝酸盐肉汤

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规格: 100g 20支

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Nitrate Broth产品基本信息

产品名称: 硝酸盐肉汤
英文名称: Nitrate Broth
培养基类型: 鉴别培养基
级别: for microbiology
品牌: ELITE-MEDIA
产品目录号: M1124-01、M1124-02、M1124-03
产品规格: 100g、20支、250g
产品外观: 黄棕色均一粉末。
颜色与澄清度: 浅-中等琥珀色透明溶液。
保存条件: 密封,2-25度保存。
注意事项: 避免呼入和皮肤接触。
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产品描述:

硝酸盐肉汤(Nitrate Broth)是硝酸盐还原试验用培养基,推荐用于辅助鉴别好氧型和兼性厌氧型革兰氏阴性菌。


原理:

微生物可以通过它们代谢某些底物来进行鉴别。将硝酸盐还原为亚硝酸盐是肠杆菌科家族的特征性能力。非发酵菌和其它各种各样的革兰氏阴性杆菌还原硝酸盐的能力各有不同。有些成员具有脱氮能力,可将硝酸盐最终还原为氮气。这种由硝酸盐产气的能力对于非葡萄糖发酵型革兰氏阴性杆菌来说是一项非常重要的鉴别特征。还原反应的终产物取决于细菌菌种。

硝酸盐肉汤是一种含有硝酸钾的培养基基础。待测的微生物接种到该培养基中,经过培养后,可以确定硝酸盐还原情况。培养基中的倒置德拉姆管用于收集脱氮产生的氮气。通过向培养基中加入两种试剂:硝酸盐试剂A(0.8%对氨基苯磺5N醋酸溶液)和硝酸盐试剂B(0.6% N,N-二甲基-α萘胺5N醋酸溶液), 来检测硝酸盐还原产物。硝酸盐试剂C来验证培养基中是否还剩余硝酸盐。

硝酸盐还原过程一般来说是一种厌氧呼吸,在这一过程中微生物从硝酸盐中获取氧。这一代谢过程的终产物通常不会进一步氧化或者同化到细胞代谢中去,而是分泌到细胞外的培养基中。但这取决于环境条件。肠杆菌科特征性地还原硝酸盐为亚硝酸盐,后者与对氨基苯磺和N,N-二甲基-α萘胺反应产生红色物质(Griess反应)。硝酸盐还原也可能产生其它终产物,如氨、一氧化二氮、羟胺等,因此另外还要加入锌粉来检测是否有没被还原的硝酸盐存在。



配方与配制方法:

成分 g/L
Beef Extract 3.0
Peptone 4.0
Proteose Peptone No.3 1.0
KNO3 1.0
pH 7.0±0.2  

配制方法:
用1L蒸馏水溶解9g硝酸盐肉汤培养基。
分装5ml培养基到16×125 mm或15×103 mm试管中。
121°C高温蒸汽灭菌15min。



实验方法:

在接种硝酸盐肉汤之前,待测微生物必须从合适的固体培养基上进行分离。使用纯培养物对于试验的有效性是十分关键的。
用无菌接种环从琼脂培养基上移取几个相似的单菌落,接种到硝酸盐肉汤中。松松的盖上管盖。35-37°C培养。 分别在培养18-24h和42-48h时检查生长情况及德拉姆管中是否有气体存在。如果培养24-48h后,有气体存在,且待测微生物为非发酵菌,则脱氮试验结果阳性。如果该微生物为发酵菌,气体可能存在也可能不存在,加入10滴硝酸盐试剂A盒10滴硝酸盐试剂B。如果在2min内有红色反应,则表明有亚硝酸盐存在。如果培养基不变色,用敷药棒加入少量(约20mg)硝酸盐试剂C。如果在5-10min内没有颜色变化,说明硝酸盐已经被还原成比亚硝酸盐更低的产物了,硝酸盐反应阳性。如果出现红色,说明试验结果为阴性。

注意事项:
亚硝酸盐测试是非常灵敏的,因此应该用未接种的培养基做空白对照,以确定培养基中不含有亚硝酸盐,玻璃器皿和试剂没有被一氧化二氮污染。
加入过多的锌粉会导致假阴性反应或者一闪即逝的颜色反应。


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