葡萄糖磷酸盐肉汤

价格:150元

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MR-VP肉汤产品基本信息

培养基名称 MR-VP肉汤,葡萄糖磷酸盐肉汤
英文名称:
MR-VP Broth,Glucose Phosphate Broth
 
培养基类型: 营养培养基
产品目录号: M248-02
产品规格:
500g   其它规格请联系我们
 
保存条件: 密封,阴凉干燥处保存。制备好的培养基2-8°C避光保存。
产品性状:
麦秸色粉末。
浅琥珀色液体。
 
注意事项: 避免摄入、呼入、皮肤接触。配制时在通风橱中进行,戴口罩、手套、护目镜。
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产品描述:


MR-VP肉汤(MR-VP Broth)也称葡萄糖磷酸盐肉汤(Glucose Phosphate Broth)用于甲基红和VP试验用培养基,用于鉴别产气大肠杆菌和其它肠道菌。

本产品配方采用《细菌学分析手册》标准配方1。






MR-VP培养基工作原理


产气肠杆菌发酵葡萄糖产酸量低,而大肠杆菌发酵葡萄糖产生大量混合酸,能够克服溶液的pH缓冲系统,使pH降低到4.4以下。在混合酸发酵途径中,葡萄糖酵解产生三种酸,乙酸、乳酸和丁二酸(琥珀酸)。每发酵1mol葡萄糖产生4mol酸(主要是乳酸和乙酸),和1mol中性产物——乙醇,1mol CO2和1mol H2。

甲基红试验中,甲基红是氢离子指示剂,< pH 4.4 显红色;pH 5.0-5.8 橘黄色;> pH 6.0 黄色。用于区分发酵葡萄糖产生大量酸的微生物与产生小量酸的微生物。鉴别葡萄糖磷酸盐肉汤培养物中痢疾大肠杆菌成员。

VP试验中,向某些微生物的葡萄糖磷酸盐肉汤培养物中加入氢氧化钾,产生红色荧光。这种颜色反应来自于乙酰甲基木醇氧化产生二乙酰,后者与蛋白胨反应,产生红色荧光。产气肠杆菌VP试验呈阳性,二大肠埃希氏菌VP试验呈阴性。甲基红试验与VP试验在检测乳糖发酵型大肠菌群时是负相关关系。





葡萄糖磷酸盐肉汤培养基的用途:


MR-VP肉汤用于甲基红试验和Voges-Proskauer试验。




葡萄糖磷酸盐肉汤培养基配方与配制方法


培养基成分: 含量:/L
缓冲性蛋白水 7.0 g
葡萄糖 5.0 g
磷酸氢二钾 5.0 g
终溶液pH 6.9± 0.2

配制方法:

1. 称取17.0g本品,加水1L去离子水溶解。

2. 121°C高温蒸汽灭菌15min。

3. 在鉴别嗜盐菌时加入2-3%氯化钠。




实验方法


甲基红试验流程:

1. Prior to inoculation, allow medium to equilibrate to room temperature.

2. By using sterile inoculating loop, inoculate the unknown microorganism taken from an 18-24 hour pure culture into the fresh, sterile medium.

3. Leave the other broth uninoculated (this will be a control).

4. Incubate aerobically at 35-37C for two to five days.

5. Following 24 hours of incubation, aliquot 1ml of the broth to a clean test tube.

6. Reincubate the remaining broth for an additional 24 hours.

7. Following 48 hours of incubation (step 5 above), aliquot 2.5ml of the broth to a clean test tube.

8. Add five drops of methyl red indicator.

9. Observe the medium for the immediate development of a red color.



VP试验流程:

1. Prior to inoculation, allow medium to equilibrate to room temperature.

2. Using organisms taken from an 18-24 hour pure culture, lightly inoculate the medium.

3. Incubate aerobically at 35ºC. for 24 hours.

4. Following 24 hours of incubation, aliquot 1ml of the broth to a clean test tube.

5. Reincubate the remaining broth for an additional 24 hours.

6. To the aliquot (step 4 above), add 0.6ml of 5% alpha-naphthol. Next add 0.2ml of 40% KOH.

7. Gently shake the tube to expose the medium to atmospheric oxygen.

8. Allow the tube to remain undisturbed for 10-15 minutes.

9. Observe the medium for a pink-red color development. The test may be read for up to, but not beyond , one hour following addition of the reagents.

Note: If test reactions are negative (no red color produced) or questionable, the test can be repeated using the reincubated broth (without reagents) from step 5 above. Reincubation and repeat testing can be performed for up to 5 days.





结果与分析



甲基红试验必须在培养至少48h后进行。过早试验,会造成假阳性。

接种量一定要小,接种量过高,结果无效。

某些微生物能够合成乙酰甲基甲醇,造成VP试验假阴性结果。这种假阴性结果一般出现在培养48-72h或更长时间后。这些微生物在琼脂平板上菌落非常小,约0.5mm,在MR-VP肉汤中生长较差。有些肠杆菌能够分解乙酰甲基甲醇,VP试验呈假阴性。

VP阳性的微生物不一定是MR试验阴性,大肠杆菌(Enterobacter hafnia)和奇异变形杆菌(Proteus mirabilis)就是例子,这两种微生物都是MR和VP阳性,虽然VP试验结果可能延迟。

甲基红试验所需培养时间最长为5天,Voges-Proskauer试验所需培养时间最长达10天。

向培养基中加入VP试剂时,一定要先加1-萘酚,后加KOH。

VP试验中在加入反应试剂1h后显红色,则结果为假阳性。


甲基红试验结果如下图。

MR试验结果


VP试验结果如下图。

VP试验结果

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