| 培养基名称 | MR-VP肉汤，葡萄糖磷酸盐肉汤 |
|---|---|
| 英文名称: |
MR-VP Broth，Glucose Phosphate Broth |
| 培养基类型: | 营养培养基 |
| 产品目录号: | M248-02 |
| 产品规格: |
500g 其它规格请联系我们 |
| 保存条件: | 密封，阴凉干燥处保存。制备好的培养基2-8°C避光保存。 |
| 产品性状: |
麦秸色粉末。 浅琥珀色液体。 |
| 注意事项: | 避免摄入、呼入、皮肤接触。配制时在通风橱中进行，戴口罩、手套、护目镜。 |
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产品描述：
MR-VP肉汤（MR-VP Broth）也称葡萄糖磷酸盐肉汤(Glucose Phosphate Broth)用于甲基红和VP试验用培养基，用于鉴别产气大肠杆菌和其它肠道菌。
本产品配方采用《细菌学分析手册》标准配方1。
MR-VP培养基工作原理
产气肠杆菌发酵葡萄糖产酸量低，而大肠杆菌发酵葡萄糖产生大量混合酸，能够克服溶液的pH缓冲系统，使pH降低到4.4以下。在混合酸发酵途径中，葡萄糖酵解产生三种酸，乙酸、乳酸和丁二酸（琥珀酸）。每发酵1mol葡萄糖产生4mol酸（主要是乳酸和乙酸），和1mol中性产物——乙醇，1mol CO2和1mol H2。
甲基红试验中，甲基红是氢离子指示剂，< pH 4.4 显红色；pH 5.0-5.8 橘黄色；> pH 6.0 黄色。用于区分发酵葡萄糖产生大量酸的微生物与产生小量酸的微生物。鉴别葡萄糖磷酸盐肉汤培养物中痢疾大肠杆菌成员。
VP试验中，向某些微生物的葡萄糖磷酸盐肉汤培养物中加入氢氧化钾，产生红色荧光。这种颜色反应来自于乙酰甲基木醇氧化产生二乙酰，后者与蛋白胨反应，产生红色荧光。产气肠杆菌VP试验呈阳性，二大肠埃希氏菌VP试验呈阴性。甲基红试验与VP试验在检测乳糖发酵型大肠菌群时是负相关关系。
葡萄糖磷酸盐肉汤培养基的用途：
MR-VP肉汤用于甲基红试验和Voges-Proskauer试验。
葡萄糖磷酸盐肉汤培养基配方与配制方法
| 培养基成分： | 含量：/L |
|---|---|
| 缓冲性蛋白水 | 7.0 g |
| 葡萄糖 | 5.0 g |
| 磷酸氢二钾 | 5.0 g |
| 终溶液pH | 6.9± 0.2 |
配制方法：
1. 称取17.0g本品，加水1L去离子水溶解。
2. 121°C高温蒸汽灭菌15min。
3. 在鉴别嗜盐菌时加入2-3%氯化钠。
实验方法
甲基红试验流程：
1. Prior to inoculation, allow medium to equilibrate to room temperature.
2. By using sterile inoculating loop, inoculate the unknown microorganism taken from an 18-24 hour pure culture into the fresh, sterile medium.
3. Leave the other broth uninoculated (this will be a control).
4. Incubate aerobically at 35-37C for two to five days.
5. Following 24 hours of incubation, aliquot 1ml of the broth to a clean test tube.
6. Reincubate the remaining broth for an additional 24 hours.
7. Following 48 hours of incubation (step 5 above), aliquot 2.5ml of the broth to a clean test tube.
8. Add five drops of methyl red indicator.
9. Observe the medium for the immediate development of a red color.
VP试验流程：
1. Prior to inoculation, allow medium to equilibrate to room temperature.
2. Using organisms taken from an 18-24 hour pure culture, lightly inoculate the medium.
3. Incubate aerobically at 35ºC. for 24 hours.
4. Following 24 hours of incubation, aliquot 1ml of the broth to a clean test tube.
5. Reincubate the remaining broth for an additional 24 hours.
6. To the aliquot (step 4 above), add 0.6ml of 5% alpha-naphthol. Next add 0.2ml of 40% KOH.
7. Gently shake the tube to expose the medium to atmospheric oxygen.
8. Allow the tube to remain undisturbed for 10-15 minutes.
9. Observe the medium for a pink-red color development. The test may be read for up to, but not beyond , one hour following addition of the reagents.
Note: If test reactions are negative (no red color produced) or questionable, the test can be repeated using the reincubated broth (without reagents) from step 5 above. Reincubation and repeat testing can be performed for up to 5 days.
结果与分析
甲基红试验必须在培养至少48h后进行。过早试验，会造成假阳性。
接种量一定要小，接种量过高，结果无效。
某些微生物能够合成乙酰甲基甲醇，造成VP试验假阴性结果。这种假阴性结果一般出现在培养48-72h或更长时间后。这些微生物在琼脂平板上菌落非常小，约0.5mm，在MR-VP肉汤中生长较差。有些肠杆菌能够分解乙酰甲基甲醇，VP试验呈假阴性。
VP阳性的微生物不一定是MR试验阴性，大肠杆菌（Enterobacter hafnia）和奇异变形杆菌（Proteus mirabilis）就是例子，这两种微生物都是MR和VP阳性，虽然VP试验结果可能延迟。
甲基红试验所需培养时间最长为5天，Voges-Proskauer试验所需培养时间最长达10天。
向培养基中加入VP试剂时，一定要先加1-萘酚，后加KOH。
VP试验中在加入反应试剂1h后显红色，则结果为假阳性。
甲基红试验结果如下图。
VP试验结果如下图。
