GV3101

价格:1500元

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农杆菌根癌农杆菌感受态细胞基本信息

菌种名称: GV3101、GV3101感受态细胞、GV3101根癌农杆菌
英文名称: Agrobacterium tumefaciens
中文名称: 根癌农杆菌,根癌土壤杆菌
基因型: C58 (rifR) Ti pMP90 (pTiC58DT-DNA) ( gentR) Nopaline
抗性: 利福平(工作浓度20ug/ml)和庆大霉素(工作浓度40ug/ml)
生长条件 28度,需氧
培养基: LB培养基或者YEB培养基
转化方法: 化学转化,或者电转化
产品应用 拟南芥、烟草、玉米、土豆等植物的转基因操作。
生长条件: 37 ℃,  有氧
菌株说明: GV3101菌株为C58型背景,核基因中含有筛选标签——利福平抗性基因rif,为了便于转化操作,此菌株携带一无自身转运功能的胭脂碱型Ti质粒pMP90 (pTiC58DT-DNA),此质粒含有vir基因 (vir基因是T-DNA插入植物基因组必需的元件,pMP90 (pTiC58DT-DNA)质粒自身的T-DNA转移功能被破坏,但可以帮助转入的双元载体T-DNA顺利转移)。pMP90 (pTiC58DT-DNA)型Ti 质粒含有筛选标签:gent,赋予GV3101菌株庆大霉素抗性,适用于拟南芥、烟草、玉米、土豆等植物的转基因操作,本公司生产的GV3101化学转化感受态细胞经特殊工艺制作,pCAMBIA2301质粒检测转化效率>104 cfu/μg DNA。

GV3101化学感受态细胞操作方法


1. 取-80℃保存的农杆菌GV3101感受态细胞于室温或手心片刻待其部分融化,处于冰水混合状态时插入冰中。
 
2.每100 μl感受态加入0.01-1 μg质粒DNA(转化效率较高,第一次使用前最好做预实验确定所加质粒的量),用手拨打管底混匀,依次于冰上静置5分钟、液氮5分钟、37℃水浴5分钟、冰浴5分钟。
 
3. 加入700 μl无抗生素的LB培养基或YEB液体培养基,于28℃振荡培养2~3小时。
 
4. 6000 rpm离心一分钟收菌,留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块涂布于含相应抗生素的LB或YEB平板上,倒置放于28℃培养箱培养2-3天
 
(当平板只含有50 μg/ml kan 时,28℃培养48 h即可;平板中同时加入50 μg/ml kan,20 μg/ml rif 时,需28℃培养60 h;如果使用的平板含有50 μg/ml rif 则需要28℃培养72-90 h)。


注意事项
 
1. 加入质粒时体积不应大于感受态体积的1/10;质粒不纯或存在乙醇等有机物污染,转化效率急剧下降;质粒增大一倍,转化效率下降一个数量级。
 
2. 混入质粒时应轻柔操作。转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
 
3. 平板上阳性克隆密度过大时,由于营养不足,阳性克隆生长变慢,菌落变小,为了获得大的菌落,应减少质粒用量。
 
4. 利福平浓度不应高于25 μg/ml,过高的利福平浓度不利于农杆菌生长,会降低其生长速度和转化效率。本公司感受态计算转化效率时所用平板只含有50 μg/ml kan,若所用平板含有20 μg/ml rif则转化效率降低到1/2。
 
5. 培养基中加入利福平的目的是防止杂菌生长、筛选农杆菌;根据所用菌株抗性加入Ti质粒筛选抗生素可防止Ti质粒丢失,但Ti质粒筛选抗生素不利于农杆菌的转基因操作,所以一般培养农杆菌时不考虑这些抗生素,Ti质粒丢失的概率极低(可以忽略)。


备注
1、农杆菌相关抗生素配方:
抗生素 配方 原液 工作液
羧苄青霉素(carb) 双蒸水溶解,0.22 μm滤膜过滤除菌 50 mg/ml 50 μg/ml
硫酸卡那霉素(kan) 双蒸水溶解,0.22 μm滤膜过滤除菌 50 mg/ml 50 μg/ml
链霉素(strep) 双蒸水溶解,0.22 μm滤膜过滤除菌 10 mg/ml 50 μg/ml
利福平(rif) DMSO溶解,0.22 μm滤膜过滤除菌 10 mg/ml 20 μg/ml
庆大霉素(gent) 双蒸水溶解,0.22 μm滤膜过滤除菌 20 mg/ml 40 μg/ml

2、常用农杆菌抗性:(R:抗;S:敏感。)
农杆菌菌株 羧苄青霉素(carb) 链霉素(strep) 利福平(rif) 庆大霉素(gent) 硫酸卡那霉素(kan)
AGL-1 R S R S S
EHA101 S S R S R
EHA105 S S R S S
LBA4404 S R R S S
GV3101 S S R R S

农杆菌根癌农杆菌感受态细胞特点和简介

农杆菌根癌农杆菌感受态细胞制备方法

农杆菌根癌农杆菌感受态细胞操作方法

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