DH10Bac

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感受态细胞基本信息

出品公司: Invitrogen
感受态细胞名称: DH10Bac
菌株类型: E.coli
产品目录号: 10361-012
培养基: LB培养基
生长条件: 37 ℃,  有氧
基因型: DH10Bac感受态细胞菌株基因型
抗性: 卡那,四环素
质粒转化条件: 42 ℃热激
应用: 重组杆粒生产菌株
诱导方法: --
菌株特点:
DH10Bac感受态细胞是用来生产用于真核细胞蛋白表达的重组杆状病毒分子。

高效DH10Bac细胞含有父Bacmid的bMON14272和辅助质粒pMON7124。父Bacmid的包含一个小型F复制子,卡钠霉素抗性基因,attTn7重组位点和lacZα互补因子。辅助质粒包含的tnsABCD的区域,提供了转座蛋白,这些转座蛋白可以 供体质粒(Donor plasmid)上的小Tn7位点插入到父本Bacmid的重组目的位点。辅助质粒pMON7124包含有四环素抗性(Tetracycline).

DH10Bac感受态细胞本身含有Kanamycin.html' target='_blank'>卡那霉素和四环素抗性。在制作感受态细胞的时候,需要加入这两种抗生素,以防止DH10Bac中的质粒父本杆粒bMON14272(Kanamycin.html' target='_blank'>卡那霉素抗性)和辅助质粒pMON7124(四环素抗性)在细胞扩增过程中丢失,提高质粒转化后的基因转座效率。

携带Tn7转座元件的 供体质粒pFastBac,含有庆大霉素抗性基因,杆状病毒多角体启动子,一个多克隆位点区域和SV40的poolyadenylation信号。 重组的Bacmid分子通过将多克隆位点包含有基因编码序列的 供体质粒pFastBa质粒DH10Ba感受态细胞转化与在编码序列克隆到多个克隆网站(重组成功的质粒在选择性培养基平板上呈现为白色菌落)。然后可以将重组Bacmid进行挑菌,小量提取分离并且转染到昆虫细胞,从而进行感染重组杆状病毒颗粒生产。

高效DH10Ba感受态细胞的能够有效抵抗连接酶和连接酶缓冲液,同时可以容忍少量未稀释的连接反应。 φ80dlacZDM15标记可以利用Bacmid载体中的β-半乳糖苷酶基因α-互补使用含X-gal平板培养基的蓝白斑菌落筛选。

综上所述,DH10Bac感受态细胞本身含有卡那霉素和四环素抗性,而供体质粒pFastbac含有庆大霉素的抗性,所以在制备DH10Bac感受态细胞时需要在培养时添加卡那霉素和四环素,而在制备杆粒时需要使用卡那霉素,四环素,庆大霉素的三抗平板。

感受态细胞特点和简介

感受态细胞制备方法

感受态细胞操作方法

感受态细胞注意事项

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