HMC3细胞ATCC CRL-3304

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HMC3细胞ATCC CRL-3304标准细胞株基本信息

细胞名称: HMC3细胞, ATCC CRL-3304细胞, 人小胶质细胞
细胞又名: Human Microglia Clone 3; CHME-3; CHME3
细胞来源: ATCC
产品货号: CRL-3304
种属来源:
组织来源:
疾病特征: Dukes'C型,IV级,结直肠腺癌
患者年龄: 胚胎
细胞描述: 通过人胎脑原代小胶质细胞的SV40依赖永生化培养,建立了HMC3细胞系。
细胞形态: 巨嗜细胞
生长特性: 贴壁生长
培养基: EMEM培养基,90%;FBS,10%。
生长条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%; 温度:37 ℃, 
传代方法: 1:2至1:6,每周2次。
冻存条件: 95% 完全培养基+5% DMSO,液氮储存
支原体检测: 阴性
安全等级: 2
应用:
神经科学,神经炎症
转化后的人小胶质细胞保留了原代小胶质细胞的特性。它们代表了可以无限期生长的同质细胞群,可能是一个方便的小胶质细胞功能生化分析系统。如初步实验所示,它们还可以支持随后的转染,这将有助于研究各种转染基因在小胶质细胞中的表达调控。
STR:
Amelogenin X
CSF1PO 10,11
D5S818 11,12
D7S820 9,11
D13S317 11
D16S539 12,13
TH01 6
TPOX 8,9
vWA 17,19
细胞说明:
 
静止期HMC3细胞对小胶质细胞/巨噬细胞标志物IBA1呈强阳性,对内毒素受体CD14呈阳性,而对星形胶质细胞标志物GFAP呈阴性。静止期HMC3细胞MHCII、CD68和CD11b标记物均为阴性,IFNγ激活后(10ng/ml,24h)表达上调。
参考文献:
1.Dello Russo C., Cappoli N., Coletta I., Mezzogori D., Paciello F., Pozzoli G., Navarra P., Battaglia A.
The human microglial HMC3 cell line: where do we stand? A systematic literature review.
J. Neuroinflamm. 15:259-259(2018)
 
2.Li B., Bedard K., Sorce S., Hinz B., Dubois-Dauphin M., Krause K.-H.
NOX4 expression in human microglia leads to constitutive generation of reactive oxygen species and to constitutive IL-6 expression.
J. Innate Immun. 1:570-581(2009)
 
3.Lindberg C., Hjorth E., Post C., Winblad B., Schultzberg M.
Cytokine production by a human microglial cell line: effects of beta-amyloid and alpha-melanocyte-stimulating hormone.
Neurotox. Res. 8:267-276(2005)
 
4.Janabi N., Peudenier S., Heron B., Ng K.H., Tardieu M.
Establishment of human microglial cell lines after transfection of primary cultures of embryonic microglial cells with the SV40 large T antigen.
Neurosci. Lett. 195:105-108(1995)
细胞图片: HMC3细胞图片

 

HMC3细胞ATCC CRL-3304人小胶质细胞接受后处理

1)  收到细胞后,请检查是否漏液,如果漏液,请 拍照片发给我们。
 
2)  请先在显微镜下确认细胞生长状态,去掉封口 膜并将T25瓶置于37℃培养约2-3h。
 
3)  弃去T25瓶中的培养基,添加6ml本公司附带的 完全培养基。
 
4)  如果细胞密度达80%-90%请及时进行细胞传代, 传代培养用6ml本公司附带的完全培养基。
 
5)  接到细胞次日,请检查细胞是否污染,若发现 污染或疑似污染,请及时与我们取得联系。
 

HMC3细胞ATCC CRL-3304人小胶质细胞培养操作

1)复苏细胞:将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻,加 入 4mL 培养基混合均匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟,弃去上清液,补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将 细胞悬液 加入 10cm 皿中,加入约 8ml 培养基,培养过夜)。第二天换液并 检查细胞密度。
 
2)细胞传代:如果细胞密度达 80%-90%,即可进行传代培养。
 
     1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。
 
     2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分 变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消 化。
     
     3. 按 6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟,弃去上清 液,补加 1-2mL 培养液后吹匀。
 
     4. 将细胞悬液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。
 
3)细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类;
 
      1. 细胞冻存时,弃去培养基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶,细胞变圆脱 落后,加入 1ml 含血清的培养基终止消化,可使用血球计数板计数。
 
      2. 4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞,根据细胞数量加入血 清和 DMSO ,轻轻混匀,DMSO 终浓度为 10%,细胞密度不低于1x106/ml,每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液,注意冻存管做好标识。
 
     3. 将冻存管置于程序降温盒中,放入-80 度冰箱,2 个小时以后转入液氮灌储 存。记录冻存 管位置以便下次拿取。

HMC3细胞ATCC CRL-3304人小胶质细胞培养注意事项

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好,培养液是否有漏液、浑浊等现象,若有上述现 象发生请及时和我们联系。
 
2. 仔细阅读细胞说明书,了解细胞相关信息,如细胞形态、所用培养基、血清比例、所 需细胞因子等,确保细胞培 养条件一致。若由于培养条件不一致而导致细胞出现问 题,责任由客户自行承担。
 
3.   用 75%酒精擦拭细胞瓶表面,显微镜下观察细胞状态。因运输问题贴壁细胞会有少量 从瓶壁脱落,将细 胞置于培养箱内静置培养 4~6 小时,再取出观察。此时多数细胞均 会贴壁,若细胞仍不能贴壁请用台盼蓝染色测定细胞活力,如果证 实细胞活力正常, 请将细胞离心后用新鲜培养基再次贴壁培养;如果染色结果显示细胞无活力,请拍下 照片及时和我们联系,信息确 认后我们为您再免费寄送一次。
 
4.   静置细胞贴壁后,请将细胞瓶内的培养基倒出,留 6~8mL 维持细胞正常培养,待细 胞汇合度  80% 左右时正常传代。
 
5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。培养瓶内多余的培养基可收集备用,细胞 传代时可以一定比例和客户 自备的培养基混合,使细胞逐渐适应培养条件。
 
6.   建议客户收到细胞后前 3 天各拍几张细胞照片,记录细胞状态,便于和 Procell 技术 部沟通交流。由 于运输的原因,个别敏感细胞会出现不稳定的情况,请及时和我们联 系,告知细胞的具体情况,以便我们的技术人员跟踪回访直至问 题解决。
 
7. 该细胞仅供科研使用。



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HMC3细胞ATCC CRL-3304标准细胞株应用举例

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