Y187

价格:1000元

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菌株基本信息

出品公司: Clontech
载体名称: Y187
质粒类型: 酵母杂交菌
基因型: MATα, ura3-52, his3-200, ade 2-101,  trp 1-901, leu 2-3, 112, gal4Δ, met–, gal80Δ, URA3 : : GAL1UAS-GAL1TATA-lacZ, MEL1
质粒转化: PEG/liAC;电转
培养基: YPDA
培养条件: 28℃,有氧,YPDA
保存方法: 30%甘油,-20℃
菌株介绍: Y187菌株是Clontech公司开发的GAL4系统酵母单杂,双杂实验用菌株,MATα型,可直接转化质粒或与MATa型酵母菌株(Y2HGold,AH109等)通过mating操作进行筛库试验。,Transformation  marker为: trp1, leu2,报告基因为:lacZ, MEL1。Y187 -GAL4酵母双杂系统需要两种质粒配套使用:PGBKT7和PGADT7。质粒PGBKT7的筛选标志为TRP1,用于表达DNA-BD(来自酵母转录因子GAL4N端1~ 174位氨基酸)与目标蛋白(Bait)的融合蛋白;质粒PGADT7的筛选标志为LEU,用于表达AD(GAL4 C端768 ~881 位氨基酸)与目标蛋白(Prey)的融合蛋白。GAL4系统原理:一个完整的酵母转录因子GAL4可分为功能上相互独立的两个结构域:位于N端1 ~ 174位氨基酸区段的DNA结合域(DNA-BD)和位于C端768 ~881 位氨基酸区段的转录激活域(AD)。DNA-BD能够识别GAL4-responsive gene的上游激活序列UAS,并与之结合。而AD可以启动UAS下游的基因进行转录。BD和AD单独存在不能激活转录,但当二者接近时,则呈现完整的GAL4活性,使含有UAS的启动子下游基因转录表达。正常条件下,BD不与AD结合,将要检测的蛋白质分别与BD和AD融合,形成 bait 融合蛋白(bait -BD)和 prey 融合蛋白(prey-AD),如果 bait 和 prey发生相互作用,就会促使 BD 和 AD 的相互接近,形成完整的GAL4,从而激活报告基因的转录。Y187有两个报告基因:lacZ, MEL1,分别由两种不同的启动子(G1,M1)启动,这两种启动子只有GAL4识别的17bp核心区相同,其余部分均不同,大大降低了酵母双杂假阳性发生的概率.Y187菌株可用YPDA在28℃有氧的条件下培养,使用30%的甘油保藏菌种。

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菌株应用举例

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