ATCC CRL-2594(MC3T3-E1)

价格:2000元

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ATCC CRL-2594(MC3T3-E1)标准细胞株基本信息

出品公司: ATCC
细胞名称: ATCC CRL-2594(MC3T3-E1), MC3T3-E1, 小鼠颅顶前骨细胞亚克隆14
存储人: RT Franceschi
种属来源: 小鼠
组织来源: 颅顶骨
细胞形态: 成纤维细胞样
生长特性: 贴壁生长
培养基: MEMα+培养基(GIBCO,货号11900024),90%;FBS,10%。
产品目录号: CRL-2594
生长条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%; 温度:37  ℃, 
传代方法: 1:2至1:6,每周2次。
冻存条件: 90% 完全培养基+10% DMSO,液氮储存
支原体检测: 阴性
安全等级: 1
应用: 该细胞是研究体外成骨细胞分化,特别是细胞外基质信号的良好模型。他们的行为类似于原发性颅骨成骨细胞。
参考文献:
Wang D, et al. Isolation and characterization of MC3T3-E1 preosteoblast subclones with distinct in vitro and in vivo differentiation/mineralization potential. J. Bone Miner. Res. 14: 893-903, 1999. PubMed: 10352097
 
forms bone-like ossicles
 


小鼠颅顶前骨细胞亚克隆14特点和简介

从克隆的但是表型各异的MC3T3-E1细胞系中分离出一系列亚克隆。 从含抗坏血酸培养基生长的成骨细胞中选择高或低成骨细胞分化、矿化的亚克隆。 MC3T3亚克隆4(ATCC CRL-2593)和MC3T3亚克隆14(ATCC CRL-2594)在抗坏血酸和3到4mM无机磷酸盐中生长表现出高水平的成骨细胞分化。 它们10天后形成一个矿化良好的细胞外基质(ECM)。 MC3T3亚克隆24(ATCC CRL-2595)和MC3T3亚克隆30(ATCC CRL-2596)在抗坏血酸中生长表现出很差的成骨细胞分化。 不形成ECM, 可以作为亚克隆4和14的阴性对照。 矿化的亚克隆选择的表达作为成骨细胞标记的mRNA,及唾液酸糖蛋白(BSP),骨钙素(OCN),和甲状旁腺激素/甲状旁腺激素相关蛋白受体的mRNA。 高或者低的分化潜能的亚克隆在培养中生产出相似数量的胶原质,表达可比较的基本水平的mRNA编码Osf2/Cbfa1,一种成骨细胞相关转录因子。 植入免疫缺陷小鼠以后,高分化性的亚克隆形成与骨类似的形成小骨的编织骨,低分化细胞只是产生纤维组织。 这些细胞系是研究体外成骨细胞分化的好模型,尤其是ECM信号。 它们和原代培养颅顶成骨细胞的行为类似。 在本库通过支原体检测。

小鼠颅顶前骨细胞亚克隆14接受后处理

1) 收到细胞后,请检查是否漏液 ,如果漏液,请拍照片发给我们。
  2) 请先在显微镜下确认细胞生长 状态,去掉封口膜并将T25瓶置于37℃培养约2-3h。
  3) 弃去T25瓶中的培养基,添加 6ml本公司附带的完全培养基。
  4) 如果细胞密度达80%-90%请及 时进行细胞传代,传代培养用6ml本公司附带的完全培养 基。
  5) 接到细胞次日,请检查细胞是 否污染,若发现污染或疑似污染,请及时与我们取得联 系。
 

小鼠颅顶前骨细胞亚克隆14培养操作

1)复苏细胞:将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻,加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟,弃去上清液,补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然 后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜(或将 细胞悬液加入 10cm 皿中,加入约 8ml 培养基,培养 过夜)。第二天换液并 检查细胞密度。
  2)细胞传代:如果细胞密度达 80%-90%,即可进行传代培养。        1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。
       2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶 中,置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分 变圆并脱落 ,迅速拿回操作台,轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。      
     3. 按 6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟,弃去上清液,补加 1-2mL 培养液后吹匀。
       4. 将细胞悬液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中 或者瓶中。
  3)细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类;
        1. 细胞冻存时,弃去培养基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶,细胞变圆 脱 落后,加入 1ml 含血清的培养基终止消化,可使用血球计数板计数。
        2. 4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞, 根据细胞数量加 入血 清和 DMSO,轻轻混匀,DMSO 终浓度为 10%,细胞密度不低于1x106/ml,每支冻 存管冻存 1ml 细胞悬液,注意冻 存管做好标识。
       3. 将冻存管置于程序降温盒中,放入-80 度冰箱,2 个小时 以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

小鼠颅顶前骨细胞亚克隆14培养注意事项

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好,培养液是否有漏液、浑浊等现象,若有上述 现 象发生请及 时和我们联系。
  2. 仔细阅读细胞说明书,了解细胞相关信息,如细胞形态、所用培养基、血清比例、 所 需细胞因子 等,确保细胞培养条件一致。若由于培养条件不一致而导致细胞出现问 题,责任由客户 自行承担。
  3.   用 75%酒精擦拭细胞瓶表面,显微镜下观察细胞状态。因运输问题贴壁细 胞会有少量 从瓶 壁脱落,将细胞置于培养箱内静置培养 4~6 小时,再取出观察。此时多数细胞均 会贴 壁,若细胞仍不能贴壁请用台盼蓝 染色测定细胞活力,如果证实细胞活力正常, 请将细胞离心后用新鲜 培养基再次贴壁培养;如果染色结果显示细胞无活 力,请拍下 照片及时和我们联系,信息确认后我们为 您再免费寄送一次。
  4.   静置细胞贴壁后,请将细胞瓶内的培养基倒出,留 6~8mL 维持细胞正常培 养,待细 胞汇 合度  80%左右时正常传代。
  5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。培养瓶内多余的培养基可收集备用,细 胞 传代时可以 一定比例和客户自备的培养基混合,使细胞逐渐适应培养条件。
  6.   建议客户收到细胞后前 3 天各拍几张细胞照片,记录细胞状态,便于和 Procell 技术 部 沟通交流。由于运输的原因,个别敏感细胞会出现不稳定的情况,请及时和我们联 系 ,告知细胞的具体情况,以便我们 的技术人员跟踪回访直至问题解决。
  7.该细胞仅供科研使用。


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