| 产品名称： | M9-SeMET高表达培养基；M9硒代甲硫氨酸标记蛋白高表达培养基 |
|---|---|
| 英文名称： | M9 SeMET High-Yield Growth Medium |
| 培养基类型： | 合成培养基 |
| 级别： | for microbiology |
| 品牌： | ELITE-MEDIA（艾礼培养基） |
| 产品目录号： | M180-01、M180-02、M180-03 |
| 产品规格： | 2L、5L、20L |
| 产品外观： | 无色至淡黄色透明溶液。 |
| 灭菌后颜色与澄清度： | 无色至淡黄色透明溶液。 |
| 保存条件： | 密封，2-25°C保存。制备好的培养基2-8°C避光保存。 |
| 注意事项： | 避免摄入、吸入、皮肤接触。 |
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产品描述：
M9-SeMET高表达培养基(M9 SeMET High-Yield Medium)是一种合成培养基，用于大肠杆菌达硒代甲硫氨酸标记的蛋白质(Seleno-Methionine labeled protein)，以制备蛋白晶体。本配方适合非氨基酸缺陷型大肠杆菌，对于营养缺陷型大肠杆菌菌株，需要添加对应成分到培养基中。
配方与配制方法
| 组分 | g/L |
| 葡萄糖 | 4 |
| MgSO4 | 0.24 |
| CaCl2 | 0.011 |
| Na2HPO4-7H2O | 12.8 |
| KH2PO4 | 3 |
| NaCl | 0.5 |
| NH4Cl | 1.0 |
| 维生素B1 | 0.001 |
| 维生素B7 | 0.001 |
| 维生素B2 | 0.001 |
| 维生素B3 | 0.001 |
| 维生素B6 | 0.001 |
| EDTA | 0.05 |
| FeCl3 x 6 H2O | 0.0083 |
| ZnCl2 | 0.00084 |
| CuCl2 x 2 H2O | 0.00013 |
| CoCl2 x 6 H2O | 0.0001 |
| H3BO3 | 0.0001 |
| MnCl2 x 6 H2O | 0.016 |
| Na2MoO4•H2O | 0.0003 |
| 赖氨酸 | 0.1 |
| 苯丙氨酸 | 0.1 |
| 苏氨酸 | 0.1 |
| 异亮氨酸 | 0.05 |
| 亮氨酸 | 0.05 |
| 缬氨酸 | 0.05 |
| SeMet（硒代甲硫氨酸） | 0.06 |
M9基础培养基
| 组分 | g/L |
| 5x M9 salts | 200 ml |
| 20%葡萄糖 | 20 ml |
| 1M MgSO4 | 2 ml |
| 1M CaCl2 | 0.1 ml |
| 1000x微量元素 | 1 ml |
| 1000x维生素 | 1 ml |
M9氨基酸
| 赖氨酸 | 0.1 |
| 苯丙氨酸 | 0.1 |
| 苏氨酸 | 0.1 |
| 异亮氨酸 | 0.05 |
| 亮氨酸 | 0.05 |
| 缬氨酸 | 0.05 |
| SeMet（硒代甲硫氨酸） | 0.06 |
实验方法：
SeMet是有毒的。培养基上清液应该集中起来当做有害物质处理。废液瓶中液面到肩处，不要到瓶口处。标记好有害物标签。参考实验室标准操作流程，正确使用SeMet。最低安全措施，操作人员需要合适的个人防护装置，包括丁腈橡胶手套、实验服、全覆盖的鞋。接种：
早晨，将甘油菌或单克隆接种到2-5ml LB培养基中，培养至下午4、5点钟。
离心菌液，丢弃上清液，收集菌体细胞。
将菌体接种到50ml或100ml M9基础培养基中，37ºC过夜培养。提前一天将M9基础培养基过夜预热和预通气，能够极大的加快起始生长速度。
接种过夜培养物
取20ml过夜培养的菌液接种到1L M9基础培养基中，37ºC培养。
直到DO600值达到0.5~0.6。一般来说需要大约10h。
加入氨基酸混合物，以抑制甲硫氨酸合成，提供硒代甲硫氨酸合成用底物。再继续培养15min。
诱导、表达、收集
接下来的流程与普通蛋白表达流程相同。例如以25ºC作为表达温度。
在加入混合氨基酸15min后，将温度降至25ºC。
10min后加入IPTG ，工作浓度为1 mM/L。
过夜表达（一般为16-18h）。
