沙门氏菌氯化镁孔雀绿肉汤

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RV肉汤产品基本信息

培养基名称: 氯化镁孔雀绿肉汤,RV肉汤培养基,RV R10肉汤
英文名称:
RV Enrichment Broth,Rappaport-Vassiliadis Salmonella Enrichment Broth,Rappaport-Vassiliadis R10 Broth
 
培养基类型: 选择性培养基,加富培养基
产品目录号:
M721-02
 
产品规格: 500g      查看其它规格
保存条件:
2-30度,避光,密封,阴凉干燥处保存。
 
产品性状: 黄色粉末或浅绿色粉末。
液体为孔雀蓝色,透明。
注意事项:
避免摄入、呼入、皮肤接触。配制时在通风橱中进行,戴口罩、手套、护目镜。
 
相关产品: RV肉汤培养基



产品描述:


氯化镁孔雀绿沙门氏菌增菌肉汤(Rappaport-Vassiliadis Enrichment Broth)简称RV肉汤,是沙门氏菌选择性增菌肉汤培养基,是液体加富型培养基。多个对比研究表明,RV增菌肉汤培养基在分离增菌沙门氏菌方面要比其它选择性增菌培养基效果好,如TT肉汤(tetrathionate-brilliant green broth)、亚硒酸肉汤培养基。



氯化镁孔雀绿肉汤工作原理:


氯化镁孔雀沙门氏菌增菌肉汤培养基的选择性基于沙门氏菌以下4个特点:与其它肠杆菌科细菌相比,沙门氏菌能够承受相对较高的渗透压;能够在pH较低环境下增菌;对孔雀绿更有耐受力;营养需求相对较低。


RV增菌肉汤是对Rappaport配方的改良。本配方的特点是减少了孔雀绿的使用量。配方中的高浓度的氯化镁抑制变形杆菌和大肠杆菌的生长,孔雀绿主要作用是抑制大肠菌群。低pH值可以抑制除沙门氏菌外的其它细菌。



乳糖发酵试验原理



氯化镁孔雀绿肉汤培养基的用途:


1. RV肉汤培养基被推荐用于从食品和环境样品(如饮用水)中分离沙门氏菌的选择性增菌培养基。

2. 氯化镁孔雀绿肉汤也可以直接用于从人的粪便样品中分离沙门氏菌,不需要预增菌,但是接种量必须小。

3. RV增菌肉汤培养基被USP推荐用于微生物限度测试。

4. 需要注意的是氯化镁孔雀绿肉汤不适用于分离伤寒沙门氏菌。当分离样品中的伤寒沙门氏菌时,要采用四硫磺酸盐肉汤(Tetrathionate Broth)进行选择性增菌。





氯化镁孔雀绿肉汤培养基配方与配制方法



培养基成分: 含量:g/L
胰酪蛋白胨 4.5
氯化钠 7.2
磷酸二氢钾 1.45
无水氯化镁(六水氯化镁) 16.8(36.0)
孔雀绿 0.036
pH
5.1± 0.2

配制方法:

1. 称取本品30g,加1000ml去离子水,温和加热搅拌至完全溶解。分装10ml到螺口试管中。

2. 115°C,高温高压灭菌15min。

3. 待培养基冷却后加入新生霉素。(可选择)




实验方法


当用氯化镁孔雀绿肉汤增菌时,接种量必须足够小,不能干扰其选择性。一般推荐的接种量为培养基体积的1/100~1/2000。

鉴于该培养基成分的温度敏感性,USAD规定在检测食品中的沙门氏菌时,RV肉汤培养基不能使用脱水培养基。





从食品和环境样品中选择性增菌沙门氏菌



1. 预增菌:取25g或25ml待测样品,加入到225ml无菌缓冲蛋白胨水中,35°C 培养16-20h。

2. 取0.1ml培养物,加入到10ml RV肉汤培养基中,42 ± 1°C,培养24-48h。培养温度的上限是43°C,因此培养箱的温度设定为42°

C,推荐用恒温水浴的方法培养。

3. 将培养物划线接种到选择性鉴定培养基XLD琼脂和另外一个琼脂平板上。35°C,培养18-24h。

4. 检查具有典型形态特征的沙门氏菌菌落,挑取单菌落,进行进一步的生物化学和免疫学鉴定。




实验结果与分析


下图右是鼠伤寒沙门氏菌增菌结果,左为空白对照


RV培养基 空白对照-鼠伤寒沙门氏菌

-- 图 1 图 2
产气 + -
测试菌种 大肠杆菌 空白对照



从食品样品中增菌和回收沙门氏菌——实验方法



在使用前,确保液体培养基温度恢复到室温。

1. 转移25g固体样品或25ml液体样品到无菌容器中,加入225ml无菌的RV肉汤培养基。用匀浆器均质。也可以每隔一分钟震荡几下,如此持续30min,确保样品均匀分散到培养基中。35ºC,培养24 小时。

2. 转移1ml上清液到合适的加富型肉汤中,如TT肉汤(Tetrathionate Broth)和亚硒酸盐胱氨酸肉汤(Selenite Cystine Broth)。35ºC培养24小时。

3. 用接种环转移上清液到合适的选择性培养基上,如HE琼脂(Hektoen Enteric Agar)、XLD琼脂(XLD Agar)和亚硫酸铋琼脂(Bismuth Sulfite Agar)。在35ºC,培养24小时。

食品中沙门氏菌的分离与鉴别 流程图

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