赖氨酸铁琼脂

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LIA培养基产品基本信息

培养基名称: LIA培养基,赖氨酸铁琼脂培养基
英文名称:
Lysine Iron Agar
Lysine Iron Medium
 
培养基类型: 鉴别培养基
产品目录号:
M718-01
 
产品规格: 500g      ►查看其它规格
保存条件:
避光,密封,阴凉干燥处保存。
 
产品性状: 麦秸色粉末。
紫红色透明至略半透明凝胶。
注意事项:
避免摄入、呼入、皮肤接触。配制时在通风橱中进行,戴口罩、手套、护目镜。
 
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产品描述:


赖氨酸铁琼脂(Lysine Iron Agar)简称LIA培养基,是一种基于赖氨酸脱羧酶活性和产硫化氢能力的鉴别性培养基。赖氨酸铁琼脂用于沙门氏菌和其它肠道致病菌检测和鉴别,是非常灵敏的鉴别培养基。

赖氨酸铁琼脂培养基最初是由Edwards和Fife设计的,旨在检测乳糖发酵型猪霍乱沙门氏菌和亚利桑那沙门氏菌。这两种快速发酵乳糖的沙门氏菌,使得培养基pH迅速下降,硫化氢挥发不能形成硫化物沉淀,造成硫化氢试验结果出现假阴性。亚利桑那沙门氏菌在乳糖胆盐培养基上形成粉色至红色的菌落,因此在食物中毒事件中常常被忽视。待测样品先用亚硫酸铋琼脂培养基进行筛选和初步鉴定,再将阳性菌落传代到赖氨酸铁琼脂培养基,如果结果为阳性,则可以确定这两种乳糖发酵型沙门氏菌的存在。




LIA培养基的工作原理:


在LIA培养基配方中,去掉了乳糖,鉴于乳糖的存在抑制或掩蔽硫化氢的生成。除去了乳糖后,这些乳糖发酵型微生物能够产出大量的硫化氢,可被检测到。溴甲酚紫是酸碱指示剂,变色范围为5.2(黄色)~6.8(紫色)。柠檬酸铁铵和硫代硫酸钠构成H2S指示系统,硫代硫酸钠作为底物,柠檬酸铁铵作H2S指示剂,与H2S反应生成黑色沉淀。能够代谢生成硫化氢的微生物表现为菌落及周围培养基变黑。葡萄糖是能量物质,含量减低至0.1%,由于肠道菌群能够发酵葡萄糖产酸,有的能够产气产酸。前者表现为,斜面显紫色管底为黄色,后者还会使得琼脂出现裂缝或出现气泡。赖氨酸的添加是为了检测赖氨酸脱羧酶活性。能够快速生产赖氨酸脱羧酶的微生物,将底物赖氨酸脱羧,脱羧反应造成碱性环境,表现为试管底部的培养基显紫色。如果在氧气存在的条件下,赖氨酸发生脱氨基反应,则表现为培养基斜面处呈红色,例如变形杆菌(Proteus)和普罗威登斯菌(Providencia )。



LIA培养基的用途:


LIA培养基用于鉴别猪霍乱沙门氏菌和亚利桑那沙门氏菌。沙门氏菌是赖氨酸脱羧酶阳性、产硫化氢的微生物,在亚硫酸铋琼脂BSA培养基上形成黑色菌落。沙门氏菌是已知的唯一能够快速脱羧赖氨酸,并生大量硫化氢的肠杆菌科微生物。赖氨酸脱羧引起的碱性反应使得整个LIA培养基呈现紫色,同时由于硫化物的生成而菌落变黑,这是该菌种的鉴别性特征。

LIA培养基可以作为变形杆菌(Proteus)和普罗威登斯菌(Providencia)的初步鉴定培养基,这两种菌能够使赖氨酸发生脱氨基反应,H2S阴性,因此培养物的表现为红色斜面紫色管底。 赖氨酸脱羧酶阴性的肠道菌表现为斜面处呈紫色,试管底部为黄色。因此单独使用赖氨酸铁琼脂培养基无法区分志贺氏菌与大肠埃希氏菌。若要区分二者,建议使用三糖铁琼脂培养基作为平行实验。

Thatcher & Clark发明了一种从食品中分离沙门氏菌的方法: 首先用选择性琼脂板对样品进行分离和纯化,然后接种到赖氨酸铁琼脂和三糖铁琼脂培养基上,这种不同培养基的结合使用,可以极大提高大肠菌群的可辨别性,例如大肠埃希氏菌和志贺氏菌。

LIA培养基不能作为初步筛选培养基,只能用于培养已经过筛选的纯培养物。




赖氨酸铁琼脂配方与配制方法



培养基成分: 含量:g/L
细菌学蛋白胨 5.0
酵母提取物 3.0
葡萄糖 1.0
L-赖氨酸 10.0
柠檬酸铁铵 0.5
硫代硫酸钠 0.04
溴甲酚紫 0.02
琼脂 15.0
pH
6.7 ± 0.2

配制方法:

1. 称取脱水培养基31.5g,用1L去离子水重悬,浸泡10min。

2. 摇晃混匀,不断搅拌,煮沸1min使其完全溶解。分装到试管中。

3. 121°C高温蒸汽灭菌15min。

4. 在冷却过程中倾斜放置试管,制备较短的斜面,使得斜面大致高于管底3cm。



实验方法


接种方法与注意事项:

1. 将赖氨酸铁琼脂制备成较短的斜面,使试管底部至斜面的距离增大,试管口用松散透气的棉塞塞住,不能堵死管口。以上处理的目的是获得缺氧与有氧两种培养环境。

2. 从选择性培养基上的单菌落中心处挑菌(越靠菌落中心的细胞越年轻),先用接种针穿刺接种到试管底部(必须接种到最底部,否则结果无效),抽出接种针,在斜面上划线接种。

3. 将接种后的试管置于培养箱中,35-37ºC,有氧,培养18-24h。观察结果。适当延长培养时间,以便颜色充分形成。



结果与分析:

试管底部的培养基变黑,既证明H2S阳性,也证明发酵产酸,因为硫化氢的生成需要酸性环境。

在鉴定H2S生成方面,LIA培养基的灵敏性不如其它铁琼脂培养基,如硫化物吲哚活性培养基(Sulfide Indole Motility Medium)。某些产硫化氢能力较弱的菌种只表现出微小的H2S活性,甚至根本检测不到。有些菌种可能需要几天的时间才能表现出硫化氢活性。

某些菌种或菌株的糖发酵反应的出检出时间可能会推迟或阴性。但是这种情况不多见,绝大部分能够正常生长但葡萄糖发酵阴性的微生物都不属于肠杆菌科。


下图是空白对照,即未接种的LIA培养基

LIA培养基 未接种

下图为志贺氏菌生长情况
LIA培养基 福氏志贺菌

下图为奇异变形杆菌生长情况
LIA培养基 奇异变形杆菌

下图为鼠伤寒沙门氏菌生长情况
LIA培养基 鼠伤寒沙门氏菌



标准菌株在LIA培养基上的生长情况如下:


菌种       试管底部  斜面       H2S活性 

沙门氏菌      紫色   紫色	 +
产气肠杆菌    紫色   紫色        -
柠檬酸杆菌    黄色   紫色	 +
大肠埃希氏菌  黄色   中性或酸性  -
志贺氏菌      黄色   紫色	 -
变形杆菌      黄色   红色        -
普罗威登斯菌  黄色   红色        -

食品中沙门氏菌的分离与鉴别实验流程


食品中沙门氏菌的分离与鉴别 流程图

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