ATCC medium 1551

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规格: 5L Kit 10L Kit

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甲烷微菌培养基产品基本信息

培养基名称 ATCC培养基1551;甲烷微菌培养基
英文名称: Methanomicrobium medium;ATCC medium 1551
培养基类型: 营养培养基
产品目录号: M806-01
产品规格: 5L Kit;10L Kit
保存条件: 粉末固体:密封,阴凉干燥处保存。
液体:于2-8°C避光保存。
产品性状: 乳白色颗粒性粉末,易结块。
灭菌后培养基:淡黄色透明液体。
注意事项: 避免摄入、呼入、皮肤接触。
配制时在通风橱中进行,戴口罩、手套、护目镜。
相关产品: 1000X Wolfe's Mineral Solution


产品描述:

ATCC Medium 1551:甲烷微菌培养基(Methanomicrobium medium)用于分离和培养甲烷微菌属细菌。


原理:

甲烷微菌属是短、弯杆菌,直径0.7μm,长1.5~2μ m,不产芽孢,革兰氏阴性,能运动,极端严格厌氧。甲烷微菌属最适生长温度40℃,最适pH 6.1~6.9。能量代谢来源于以H2或甲酸盐为电子供体还原 CO2为CH4释放的能量。甲烷微菌不能利用乙酸、甲基胺和甲醇。能够以氨为唯一氮源,以硫化物或单质硫为硫源,要求瘤胃液中的生长因子(包括乙酸、异丁酸、异戊酸、2-甲基丁酸、色氨酸、吡哆醇、硫胺素、生物素和维生素B12)。模式菌种是运动甲烷微菌(Methanomicrobium mobile)。


配方与配制方法

瘤胃液(澄清) 300.0 ml
磷酸氢二钾 0.3 g
磷酸二氢钾 0.3 g
硫酸铵 0.3 g
氯化钠 0.6 g
硫酸镁(七水) 0.13 g
氯化钙(二水) 8.0 mg
1000X Wolfes矿物质溶液 1.0 ml
1000X Wolfes维生素溶液 1.0 ml
硫酸亚铁(七水) 2.0 mg
碳酸氢钠 2.0 g
酵母提取物 1.0 g
酪蛋白胨 1.0 g
脂肪酸混合物 20.0 ml
刃天青 1.0 mg
L-半胱氨酸盐酸盐 0.5 g
硫化钠(九水) 0.5 g
pH 6.5  


称取3.641g培养基基础(不含碳酸氢钠、半胱氨酸盐酸盐、硫化钠),用680ml去离子水溶解。加入300ml澄清瘤胃液。调节pH至6.5。煮沸5-10s,然后在N2-CO2 (80:20, v/v)条件下冷却。加入碳酸氢钠到培养基中。在80% N2,20% CO2条件下分装到合适的容器中,如分装20ml到120ml铝密封瓶中。121°C 灭菌15 min。灭菌结束后过夜静止。

在N2环境下,分别灭菌5%半胱氨酸盐酸盐溶液和5%九水硫化钠溶液。在接种前加入两种还原剂溶液。向接种后的培养瓶中用H2-CO2 (80:20, v/v)加压至200kPa。

预先加热瘤胃内容物121℃灭菌15min。用无菌离心瓶在25,000 x g 离心15min。取上清液。整个过程在无菌条件下进行。调节pH至6.5。


脂肪酸混合物配方:
戊酸 0.7 ml
异戊酸 0.7 ml
a-甲基丁酸 0.5 ml
异丁酸 0.5 ml
去离子水 1.0 L


1000X Wolfes矿物质溶液(Wolfe's Mineral Solution):

Wolfes矿物质溶液

向大约500ml蒸馏水中加入氨三乙酸,用KOH调节pH至6.5,以使氨三乙酸完全溶解。用蒸馏水定容至1L。一次性加入其余成分。搅拌至完全溶解。过滤除菌。


1000X Wolfes维生素溶液:

Wolfe's Vitamin Solution

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